一、概述

(一)基本概念

灭菌：系指用物理或化学等方法杀灭或除去所有致病和非致病微生物繁殖体和芽孢的手段

无菌：系指在任一指定物体、介质或环境中，不得存在任何活的微生物。

防腐：系指用物理或化学方法抑制微生物的生长与繁殖的手段。

消毒：系指用物理或化学方法杀灭或除去病原微生物的手段。

(二)灭菌与无菌技术

1.物理灭菌技术

利用蛋白质与核酸具有遇热、射线不稳定的特性，采用加热、射线和过滤方法，杀灭或除去微生物的技术称为物理灭菌法。

(1)干热灭菌法：

适用于耐火焰材质(如金属、玻璃及瓷器等)的物品与用具的灭菌;干热空气灭菌法系指用高温干热空气灭菌的方法，适用于耐高温的玻璃和金属制品以及不允许湿气穿透的油脂类(如油性软膏基质、注射用油等)和耐高温的粉末化学药品的灭菌，不适于橡胶、塑料及大部分药品的灭菌。

(2)湿热灭菌法：

系指用饱和蒸汽、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法。

1)热压灭菌法：适用于耐高温和耐高压蒸汽的所有药物制剂。

影响湿热灭菌的主要因素有：①微生物的种类与数量;②蒸汽性质;③药品性质和灭菌时间;④其他如介质pH对微生物的生长和活力具有较大影响。热压灭菌应采用饱和蒸汽。

2)流通蒸汽灭菌法：该法适用于消毒及不耐高热制剂的灭菌。但不能保证杀灭所有的芽孢，是非可靠的灭菌法。

3)煮沸灭菌法：系指将待灭菌物置沸水中加热灭菌的方法。

4)低温间歇灭菌法：让待灭菌物中的芽孢发育成繁殖体，再次加热灭菌、放置，反复多次，直至杀灭所有芽孢。该法适合于不耐高温、热敏感物料和制剂的灭菌。

(3)过滤灭菌法：

系指采用过滤法除去微生物的方法。该法适合于对热不稳定的药物溶液、气体、水等物品的灭菌。常用的除菌过滤器有：0.22μm或0.3μm的微孔滤膜滤器和G6(号)垂熔玻璃滤器。

(4)射线灭菌法：

1)辐射灭菌法：适合于热敏物料和制剂的灭菌。

2)微波灭菌法：采用微波照射产生的热能杀灭微生物和芽孢的方法。该法适合液态和固体物料的灭菌，且对固体物料具有干燥作用。

3)紫外线灭菌法：灭菌力最强的波长为254nm。该方法属于表面灭菌。紫外线不仅能使核酸蛋白变性，而且能使空气中氧气产生微量臭氧，而达到共同杀菌作用。该法适合于照射物表面灭菌、无菌室空气及蒸馏水的灭菌;不适合于药液的灭菌及固体物料深部的灭菌。

2.化学灭菌法

环氧乙烷、甲醛\乙醇、1%聚维酮碘溶液、0.1%～0.2%苯扎溴铵(新洁尔灭)

3.无菌操作法 注射剂、眼用制剂、皮试液、海绵剂和创伤制剂的制备。　　4.灭菌参数(F值和F0值)

灭菌过程中存在的问题：

1)灭菌温度测量的不是被灭菌物体内部的温度

2)现行的菌检方法难以检出极微量微生物

因此对现行的灭菌方法进行可靠性验证，F与F0可作为法可靠性参数。

(1)D值与Z值

1.D值

D定义：在一定温度下杀死被灭菌体系中90%的微生物所需的时间。

2.Z值

Z值为灭菌温度系数，系指某一微生物的D值，下降一个对数单位，所需升高温度的度数。也就是灭菌时间减到原来的1/10，所需升高温度的度数。

【精要速记】D值(时间)—Z值(温度)—F值(时间)

(2)F值与F0

F值定义：为干热灭菌过程的可靠性参数。

F0：为热压灭菌过程的可靠性参数。F0为一定温度(T)

【精要速记】F值——干热灭菌，F0——热压灭菌。

(三)空气净化技术

1.洁净室空气净化标准与方法。

(2)无菌检查法; “直接接种法”和“薄膜过滤法”。

3.空气净化技术

(1)过滤方式：空气过滤属于介质过滤，可分为表面过滤和深层过滤。

(2)空气过滤机理及影响因素

1)空气过滤机理：拦截作用和吸附作用。

4.洁净室的设计

通常可分为一般生产区、控制区、洁净区和无菌区。根据GMP设计要求，一般生产区无洁净度要求;控制区的洁净度要求为10万级;洁净区的洁净度要求为1万级;无菌区的洁净度要求为100级。