第四节 核酸理化性质

　　一、核酸的一般性质

　　1、核酸是两性电解质：含有酸性的磷酸基和碱性的碱基。因磷酸基的酸性较强，核酸通常表现为较强的酸性，核酸可在电场中泳动，也可进行离子交换分离。

　　2、在碱性条件下，RNA不稳定：可在室温下水解。利用这个性质可以测定RNA的碱基组成，也可清除DNA溶液中混杂的RNA。

　　3、核酸多是线性分子：由于DNA细长，其在溶液中的粘度很高，RNA分子比DNA短，在溶液中粘度低于DNA。

　　二、核酸的紫外线吸收

　　1、对核酸进行定量分析：核酸分子中的碱基都含有共轭双键，在260nm波长处有最大紫外吸收。

　　2、估计核酸的纯度：蛋白质在280nm波长处有最大吸收，可利用溶液260nm和280nm处吸光度的比值来估计核酸的纯度。对于纯的DNA和RNA来说，其A260/A280应分别为1.8和2.0，若有蛋白质和酚的污染，比值下降。

　　三、核酸变性与复性

　　(一)变性：指在某些因素的作用下，维系DNA双螺旋的次级键断裂(碱基堆砌力和氢键)双螺旋结构解开成单链的过程称为变性。

　　变性因素：加热和化学物质，如有机溶剂、酸、碱、尿素和酰胺等。实验中最常用的DNA的变性方法是热变性。

　　变性后的性质：粘滞度下降、紫外吸收值改变等。

　　DNA增色效应：变性使原来位于双螺旋内部的碱基暴露出来，造成在260nm处的紫外吸收值增高的现象。

　　Tm：是DNA双链解开50%时的环境温度。G+C含量越高，Tm值越大;A+T含量越高，Tm值越小。

　　(二)复性：DNA的变性是可逆的，当变性后，温度再缓慢下降，解开的两条链又重新聚合形成双螺旋结构。此过程也叫退火。

　　退火温度：复性的最佳温度是比Tm低25℃，若时间较长，可以复性至天然DNA的状态。若在DNA变性后，温度突然下调到4℃以下，复性则不能进行。这是保存变性状态DNA的良好方法。

　　复习：

　　DNA和RNA结构特点与功能。

　　介绍：标准吸光度值为1时，各种标准浓度。

　　原因：G和C之间有3个氢键。

　　分子杂交与PCR都是根据变性复性的原理设计的。