第九章 病原性球菌

　　一、葡萄球菌属

　　1.生物学特性

　　(1)形态染色：球形或略呈椭圆形，典型的葡萄球菌排列成葡萄串状，无鞭毛，无芽胞，革兰染色为阳性。

　　(2)培养特性：营养要求不高，在普通基础培养基上生长良好，兼性厌氧或需氧，最适生长温度为37℃，最适pH值为7.4，与普通平板上可形成圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明的菌落，菌落因菌种不同而呈现金黄色、白色或柠檬色，色素为脂溶性。血平板上，致病菌株可形成β溶血现象。

　　(3)生化反应：触酶阳性，多数菌株能够分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气，致病菌株能分解甘露醇。

　　(4)抗原结构：主要有葡萄球菌A蛋白(SPA)，荚膜抗原及多糖抗原。

　　(5)抵抗力：在无芽胞的细菌中抵抗力最强。对青霉素等抗生素敏感。但是耐药菌株逐年增多，已成为医院内感染最常见的致病菌。

　　(6)分类：根据色素、生化反应等表型的不同，葡萄球菌可分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌3种。

　　2.临床特征

　　(1)致病物质：凝固酶、耐热核酸酶等。凝固酶是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标。毒素包括葡萄球菌溶素，杀白细胞素，肠毒素，表皮剥脱毒素，毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)。

　　(2)所致疾病：有侵袭性和毒素性两种类型。

　　侵袭性疾病主要引起化脓性炎症，是葡萄球菌引起的最常见感染。如局部感染的疖、痈、毛囊炎等皮肤及肺炎等内脏器官感染;全身感染的败血症、脓毒血症等。

　　毒素性疾病由葡萄球菌产生的有关外毒素引起，主要有①食物中毒②假膜性肠炎③烫伤样皮肤综合征④毒性休克综合征。

　　(3)免疫性：人类对葡萄球菌有一定的天然免疫力。病愈后免疫力不牢固。

　　3.微生物检验

　　(1)标本采集：不同病型采集不同标本。化脓性病灶采集脓汁、渗出液;疑为败血症采集血液;脑膜炎采集脑脊液;食物中毒采集病人呕吐物、可疑食物和粪便等，采集时避免病灶周围正常菌群污染。

　　(2)检验程序及方法：

　　1)直接涂片镜检：无菌体液标本经染色直接显微镜镜检后，发现有革兰阳性球菌，可做出“查见类似葡萄球菌属革兰阳性球菌”的初步报告。

　　2)分离培养和鉴定：不同标本经处理后接种血琼脂平板。经37℃孵育18～24h，观察菌落形态，致病葡萄球菌有β溶血现象。挑选可疑菌落进一步作形态、生化等方面的鉴定。鉴定试验方法及要点如下：

　　①血浆凝固酶试验，鉴定致病性葡萄球菌;

　　②耐热核酸酶试验，用于检测金黄色葡萄球菌产生的耐热核酸酶;

　　③甘露醇发酵试验，金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇，该试验为阳性;

　　④SPA的检测，是鉴定金黄色葡萄球菌的指标之一;

　　⑤触酶试验，葡萄球菌该试验阴性，以区别于链球菌;

　　⑥肠毒素的测定，将食物中毒病人的呕吐物或剩余物接种于肉汤管中，孵育后取上清液注射至6～8周龄的幼猫腹腔，若于4h内发生呕吐、腹泻、体温升高、死亡等现象，提示有肠毒素存在。

　　二、链球菌属

　　1.生物学性状

　　(1)形态与染色：球形或椭圆形，其中链球菌呈链状排列，革兰染色阳性，无鞭毛，无芽胞。

　　(2)培养特性：营养要求较高，在血琼脂平板上可形成灰白色、圆形细小菌落，不同群链球菌可出现不同溶血现象，即β溶血环，α溶血环及不溶血。

　　(3)生化反应：触酶阴性，一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两个特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。

　　(4)抗原结构：主要有蛋白质抗原，多糖抗原，核蛋白抗原。其中M蛋白抗原与致病性有关，多糖抗原又称为C抗原，根据C抗原不同，将链球菌分为20个群，核蛋白抗原无特异性。

　　(5)分类：按链球菌细胞壁中多糖抗原的不同，将其分为20个血清群(A～H，K～V)，对人致病的链球菌约90%属于A群，即化脓性链球菌。

　　(6)抵抗力：不强，对常用消毒剂抗菌药物均敏感。青霉素为首选治疗药物，极少发现耐青霉素的菌株。

　　2.临床特征

　　(1)致病物质：A群链球菌致病力最强，有较强的侵袭力，是最常见的致病性链球菌。主要有①链球菌溶血素：分为链球菌溶血素O(SLO)和链球菌溶血素S(SLS)两种。②致热外毒素。③侵袭性物质：主要包括脂磷壁酸、纤维黏连蛋白结合蛋白、M蛋白等黏附素以及透明质酸酶、链激酶、链道酶等侵袭性酶。

　　(2)所致疾病及临床表现：A群链球菌引起的疾病约占人类链球菌感染的90%，可引起化脓性、中毒性和超敏反应性三类疾病。①化脓性炎症②猩红热③链球菌性超敏反应性疾病。

　　(3)免疫性：人体感染链球菌后血清中可出现多种抗体，但因链球菌的型别多，各型间无交叉免疫力，故常反复感染。

　　3.微生物检验

　　(1)标本采集：根据不同疾病的特点取不同标本。

　　(2)检验程序及方法：

　　1)直接涂片镜检：无污染标本经直接涂片革兰染色后镜检，发现有典型的链状排列革兰阳性球菌时，可初步报告。

　　2)分离培养和鉴定：采用血琼脂平板培养有助于识别链球菌的溶血特性和鉴定，在5%C02环境下，经37℃孵育24h，观察菌落性状，取可疑菌落做进一步鉴定。主要鉴定试验方法及要点如下：

　　①杆菌肽试验敏感试验，出现抑菌环者即可初步鉴定为A群链球菌。

　　②Optochin敏感试验，抑菌环~14mm为敏感，肺炎链球菌抑菌环为敏感，其他链球菌不出现或抑菌环<14mm，本试验较胆盐溶菌试验鉴别价值更可靠。

　　③胆盐溶菌试验，肺炎链球菌阳性，草绿色链球菌阴性。

　　④血清学鉴定试验，目前应用较普遍的是商品化试剂盒——STREPTEX，它主要用于检测链球菌群的特异性抗原，出现凝集者为阳性。

　　⑤抗SLO试验，常用于风湿性关节炎、急性肾小球肾炎的辅助诊断。

　　三、肺炎链球菌

　　1.生物学特性：为革兰阳性球菌，呈矛尖状，成双排列，有荚膜，无鞭毛，无芽胞。营养要求较高，兼性厌氧菌，可形成中心下陷的脐窝状的菌落，有自溶现象。可分解多种糖类，产酸不产气，多数菌株分解菊糖，胆汁溶解试验阳性，Optochin敏感试验阳性，可作为肺炎链球菌与草绿色链球菌的鉴别。其抗原成分包括荚膜多糖，菌体多糖，M蛋白。抵抗力弱，有荚膜的抵抗力强，对一般消毒剂敏感。对青霉素、红霉素敏感。

　　2.临床特征：肺炎链球菌是一种条件致病菌，可以引起大叶性肺炎，其次是支气管炎，可继发胸膜炎、脓胸，还可引起中耳炎、乳突炎和脑膜炎。

　　3.微生物检验

　　(1)标本的采集：根据病种采集不同的标本。

　　(2)检验程序及方法：

　　1)直接涂片检查，除血液标本，其他标本均可做直接涂片检查。如见革兰阳性矛尖状双球菌，周围有较宽的透明区，经荚膜染色确认后可初诊，并报告“找到肺炎链球菌”。

　　2)分离培养，血液、脑脊液增菌培养后，呈均匀浑浊，且有绿色荧光。血液、脑脊液增菌后，脓汁或痰标本直接接种于血琼脂，置5%～10%CO2环境中培养后观察菌落，并取可疑菌落做进一步菊糖发酵实训，胆盐溶菌试验和Optochin敏感试验。

　　3)动物实训，小白鼠对肺炎链球菌极为敏感，通常在接种后12～36h，因败血症而死亡。

　　4)荚膜肿胀试验：将接种待检菌的小白鼠腹腔液置于玻片上，混入不稀释的抗荚膜抗原的免疫血清，加少量碱性美蓝染色液后，覆盖玻片，用油镜检查，如发现荚膜出现肿胀为阳性。