五、问答题

　　1. PCR技术的工作原理是什么?(5分)

　　【变性：使模板DNA完全变性成为单链

　　退火：使引物与模板 DNA退火结合

　　延伸：DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA合成反应。】

　　六、论述题

　　1.印渍杂交的主要实验方法有哪些?主要用途是什么?(6分)

　　【目前常用的生物大分子印渍技术包括：

　　(1)：DNA印渍技术(DNA blotting)，被广泛称为Southern blotting。它主要用于基因组DNA的分析，尤其是用于某种基因在基因组中的定位研究，也可以用于分析重组质粒和噬菌体。

　　(2)RNA印渍技术(RNA blotting)，也称为 Northern blotting。主要用于检测某一组织或细胞中已知的特异mRNA的表达水平以及比较不同组织和细胞的同一基因的表达情况。

　　(3)蛋白质的印渍分析，也称为免疫印渍技术(immunoblotting)或Western blotting。主要用于检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白分子的相互作用研究等。

　　斑点印渍、原位杂交也是常用的分子杂交方法。在此基础上发展起来的DNA芯片可以在小面积的表面固定数千甚至上万个探针用于细胞样品中基因表达谱及基因突变的分析。生物芯片对核酸的研究工作以及未来的诊断技术都将产生革命性的影响。】

　　2.核酸分子杂交的主要实验方法有哪些?主要用途是什么?(8分)

　　【目前常用的生物大分子印渍技术包括：

　　(1)：DNA印渍技术(DNA blotting)，被广泛称为Southern blotting。它主要用于基因组DNA的分析，尤其是用于某种基因在基因组中的定位研究，也可以用于分析重组质粒和噬菌体。

　　(2)RNA印渍技术(RNA blotting)，也称为 Northern blotting。DNA印渍技术主要用于检测某一组织或细胞中已知的特异mRNA的表达水平以及比较不同组织和细胞的同一基因的表达情况。

　　(3)斑点杂交，不经电泳分离直接将样品点在NC膜上用于杂交。

　　(4)原位杂交在组织切片或涂片上进行杂交。

　　(5)DNA芯片可以在小面积的表面固定数千甚至上万个探针用于细胞样品中基因表达谱及基因突变的分析。生物芯片对核酸的研究工作以及未来的诊断技术都将产生革命性的影响。】