二、检验方法

　　1、直接检测法：

　　(1)显微镜检验：暗视野显微镜直接检查各种标本中的钩端螺旋体，方法简单快速直观，但检出率低。

　　(2)核酸检测：

　　PCR：采用PCR检测标本中钩体特异性DNA片段，方法快速、敏感

　　DNA分子杂交：采用同位素、地高辛或生物素标记特异性DNA探针，以聚合酶链反应和分子杂交技术检测钩体核酸，方法快速敏感

　　2、分离培养

　　(1)培养：korthof 培养基(含10%兔血清)，28℃，7~14d：培养基呈云雾状浑浊

　　(2)鉴定：培养物轻度混浊，取离心沉渣暗视野或镀银染色等显微镜观察，若有问号钩体存在，则需进行血清学鉴定

　　1)显微镜凝集试验：应用最广泛的钩体血清学鉴定，特异性和敏感性高。

　　①　抗原制备：取标准菌株4~7d的培养物，每个视野可见50~60条钩体，运动活泼，无自凝现象

　　②　试验方法：取患者血清，稀释1:50、1:100、1:200......1:1600或更高，取不同稀释度0.1ml置有机玻璃板凹槽内，分别加入等量的15个标准菌株，同时用生理盐水作抗原对照，28~30℃，2h;取出1滴于玻片上，盖上盖玻片，在暗视野观察结果

　　③　结果判断：

　　++++：表示几乎全部钩体凝集

　　+++：表示有75%以上菌体凝集或溶解

　　++：表示有50%以上菌体凝集或溶解

　　+：表示有25%以上菌体凝集或溶解

　　—：全部钩体正常，分散存在，无凝块

　　单份血清抗体效价≥1:300或恢复血清效价较急性期升高4倍以上有诊断意义。

　　2)间接凝集试验：快速简便，但特异性不及显微镜凝集试验。

　　将钩体的属特异性抗原吸附于载体颗粒上，在与患者血清作用，若带测血清中有相应抗体，则出现凝集现象。

　　3)酶联免疫吸附试验：该病的快速诊断。

　　4)TR/Patoc I特异性属抗原玻片凝集试验：玻片法简便、特异、无传染性、抗原易于保存，适合于各级医院特别是基层医院使用，还可用于大规模的流行病学调查。

　　5)间接免疫荧光试验：特异性和敏感度较高，抗体出现较早，消失也快，病后1~2y 即转阴，适用于疾病的早期诊断。

　　6)动物实验：动物是分离问号钩体比较敏感的方法，尤其适用于杂菌污染的标本。

　　防治原则

　　预防：做好防鼠、灭鼠工作，加强对带菌家畜的管理;对易感人群接种含当地流行血清型的多价死疫苗。(钩端螺旋体外膜疫苗)

　　治疗：首选青霉素，过敏者可用庆大霉素或多西环素。

　　例题：

　　1.人工培养钩端螺旋体的最适宜温度是

　　A.35℃----38℃ B. 28℃---30℃

　　C. 37℃---39℃ D. 22℃---25℃

　　E. 40℃---42℃

　　2.初期梅毒患者,检查病原应采取的标本是

　　A. 尿液 B. 硬性下疳渗出液

　　C. 血液 D. 梅毒疹渗出液

　　E. 脑脊液

　　3.检测梅毒的不加热血清反应使用的抗原是

　　A. 梅毒螺旋体 B. 非致病性螺旋体

　　C. 致敏羊红细胞 D. 牛心肌类脂质

　　E. 致敏羊抗体

　　参考答案

　　1.B 2. B 3. D