第二节 生殖毒性及其评定

　　一、生殖毒性表现

　　外来化合物对生殖过程的损害作用可以表现为性淡漠、性无能或各种形式的性功能减退。雌性可出现排卵规律改变、月经失调或闭经、卵巢萎缩、受孕减少、胚胎死亡、生殖力降低、不孕或不育等。雄性可表现为睾丸萎缩或坏死、精子数目减少等。

　　二、生殖毒性作用的评定

　　外来化合物对生殖过程作用的评定主要通过生殖毒性试验来进行，过去也称为繁殖试验。生殖毒性试验可以全面反映外来化合物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的影响。评定的主要依据是交配后母体受孕情况(受孕率)、妊娠过程情况(正常妊娠率)、子代动物分娩出生情况(出生存活率)、授乳哺育情况(哺育成活率)以及断奶后发育情况等。此外还可同时观察出生幼仔是否有畸形出现，但畸形观察主要在发育毒性评定中进行。

　　(一)试验方法原则

　　生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔。大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。

　　一般设三个剂量组，另设对照组。最高剂量组剂量应该超过预期人类实际接触水平，希望能使亲代动物出现轻度中毒，但不出现死亡或死亡率不超过10%，也不能完全丧失生育能力。低剂量组的亲代动物不应观察到任何中毒症状。另设中间剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。中间剂量与高剂量和低剂量应呈等比级数。

　　最高剂量组轻度中毒的概念是进食量显著减少，体重明显下降。要求最高剂量组出现轻度中毒的目的是表明在已能引起中毒剂量下，如仍不致影响正常生殖过程，则表示该受试物确实不具有生殖毒性作用。反之，如剂量过低，则难于确定受试物是否确实不具有生殖毒性，有可能因剂量不足，未达到最小有作用剂量。

　　剂量的确定可用少数动物进行预试，如已进行过亚慢性和急性毒性试验，则最高剂量也可略高于亚慢性毒性试验中最大无作用剂量，或相当于LD50的1/10左右。最低剂量可相当于最高剂量的1/30。如经多次试验确实证实1 000mg/kg体重剂量对生育力无损害作用，或最高剂量可引起亲代动物表现一般毒性作用，但对生育力无不利影响，则可不进行其它剂量试验。

　　动物接触受试物的方式应参照人类实际接触途径。一般可混入饲料或饮水中，由动物摄取;也可采用灌胃或胶囊法。试验期间每周应根据动物体重并参照进食量(大鼠可按每日15～20g，小鼠每日5～10g计算)和要求的摄入剂量(mg/kg体重/日)调整饲料中应混入受试物的数量。应始终保持达到动物应摄入的剂量。

　　利用大鼠或小鼠进行试验时，每组雌雄各16～20只，或雌性16～20只，雄性8～10只。

　　(二)试验方法

　　现以大鼠为例，介绍三代两窝生殖试验法和两代一窝生殖试验法：

　　1. 三代两窝生殖试验

　　大鼠断奶或出生8周后，开始喂受试物或以其它方式与受试物接触，共进行8～12周，即直到性发育成熟，相当出生后4个月左右。每周至少称体重一次，记录进食量并观察有无中毒症状或死亡。将雌雄亲代动物(F0)同笼交配，雌雄比例为1：1或2：1，直到受孕或进行3周为止。雌鼠受孕后即单笼饲养，继续接触受试物。交配3周后，如仍未受孕，则停止交配，并进行生殖器官病理学检查。

　　确定是否受孕的方法是每日清晨进行雌性动物阴道涂片，检查有无精子;亦可检查阴道有无阴栓出现，以确定受精日期。小鼠阴栓可在阴道口存留较长时间，但在大鼠极易脱落，次晨检查时往往在笼下粪便盘中检出。发现阴栓或检出精子，即为受孕0日，也有作为受孕第1日。

　　亲代动物(F0)所生仔鼠为第一代(F1)。出生后应检查每窝幼仔数、死亡数以及肉眼可见幼仔畸形。出生后第4天和第21天逐个称取重量，仔鼠断奶后，母鼠休息10天，再与雄鼠交配一次，并生出第二窝仔鼠，亲代共生出仔鼠两窝，分别为F1a 和F1b。F1b出生后，将雄性亲鼠淘汰，雌性亲鼠继续喂受试物，直至F1b出生后21天断奶为止。F1a断奶后观察其发育情况，不再喂受试物。F1b断奶后，继续接触受试物8 ～12周，直到性发育成熟，选出雌雄各16～20只，按前法进行交配。F1b所产第一窝幼仔为F2a，F2a 断奶后，其母鼠F1b休息10天，再次交配，所生幼仔为F2b，F2b 断奶后，将F1b 淘汰。F2b 交配处理方法与F1b 相同。但F2b 也可只交配一次，所产仔鼠为F3a，不再进行第二次交配，试验结束。

　　2.两代一窝和一代一窝生殖试验

　　近年来许多国家与机构多规定采用两代一窝或一代一窝试验法，我国国家环境保护局《化学品测试准则(1990年)》即采用两代生殖试验或一代生殖试验。两代一窝生殖试验法基本程序与三代两窝试验法相同，但只进行到第二代F2，每代只交配一窝。

　　(三)观察指标