五.蛋白质的沉淀作用

　　蛋白质沉淀作用：在某些因素条件下，蛋白质从溶液中析出的现象,称为蛋白质的沉淀作用。

　　沉淀反应：凡是能破坏水化膜以及能中和电荷的物质均可使蛋白质沉淀

　　蛋白质沉淀类型:

　　1.可逆的沉淀作用：温和条件，改变溶液pH或Pr所带电荷;Pr结构和性质没有变化;适当条件下可重新溶解非变性沉淀。pI沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等。

　　(1)盐溶与盐析：在盐浓度很稀的范围内，随着盐浓度增加，蛋白质的溶解度亦随之增加，这种现象称盐溶。盐析：向蛋白质溶液中加入大量的中性盐，使蛋白质溶解度下降，从溶液中沉淀析出的现象。

　　盐析作用的发生机理：夺取蛋白质表面的水化膜;中和了电荷。沉淀的蛋白质不变性

　　不同蛋白质表面电荷量不同，水化膜的厚度不一样，盐析所需要的中性盐浓度也不一样，一般而言，相对分子质量大的容易盐析，相对分子质量越小，所需盐浓度越高。

　　分级盐析：同一溶液中不同相对分子质量的蛋白质，可通过逐步提高盐浓度的方法逐一沉淀分离出来。

　　分级盐析：卵清白蛋白在pH7半饱和硫酸胺溶液中析出;卵清球蛋白在饱和硫酸胺溶液中析出。

　　(2)有机溶剂沉淀(水溶性)：

　　原理：破坏水化膜;降低了水的介电常数;条件：pH=pI;特点：常在低温下进行;常用有机溶剂：乙醇、丙酮等

　　水溶性有机溶剂如丙酮、乙醇等，具有介电常数比较小，与水的亲和力大，能以任何比例与水相溶等特点。当向蛋白质水溶液中加入适量这类溶剂时，它能夺取蛋白质颗粒表面的水化膜，同时，还能降低水的介电常数，增加蛋白质颗粒间的静电相互作用，导致蛋白质分子聚集絮结沉淀。

　　2.不可逆的沉淀作用：强烈沉淀条件;破坏Pr胶体溶液稳定性;也破坏Pr结构和性质;沉淀不能再重新溶解变性沉淀;如加热沉淀、强酸/碱沉淀、重金属盐和有机酸沉淀等。

　　(1)重金属盐沉淀：当溶液pH>pI时，蛋白质颗粒带负电荷，易与重金属离子(Hg2+、Pb2+、Cu2+、Ag+等)结合，生成不溶性盐类，沉淀析出。蛋白质变性。

　　(2)有机酸类沉淀：当溶液pH

　　六、蛋白质的紫外吸收特征

　　紫外吸收：280nm，贡献者是Trp、Tyr、Phe，最主要的是Trp，核酸的紫外吸收峰在260nm。

　　七、蛋白质的颜色反应

　　可以用来定量定性测定蛋白质

　　1.双缩脲反应：将尿素加热到180℃，则两分子尿素缩合成一分子双缩脲，并放出一分子氨气。双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生红紫色络合物，该反应称为双缩脲反应。

　　蛋白质分子中含有许多和双缩脲结构相似的肽键，也能起双缩脲反应，形成红紫色络合物。氨基酸和二肽没有此反应。

　　2.黄色反应(芳香族氨基酸所特有的反应)：蛋白质溶液遇硝酸后，先产生白色沉淀，加热则白色沉淀变成黄色，再加碱，颜色加深成桔黄色的硝基苯衍生物。

　　皮肤遇到HNO3的情况，白→黄→橙黄。

　　3.乙醛酸反应(色氨酸所特有的反应)：在含有蛋白质的溶液中加入乙醛酸，并沿试管壁慢慢注入浓硫酸，在两液层之间会出现紫色环。

　　色氨酸及含有色氨酸的蛋白质有此反应，但不含色氨酸的白明胶无此反应。

　　4.茚三酮反应 ：蛋白质和氨基酸一样，也能与水合茚三酮反应，生成蓝紫色化合物。实践中常利用这一反应来检测蛋白质的存在。但不能区别蛋白质与氨基酸。