第二节 气相色谱法和高效液相色谱法

　　掌握气相色谱法和高效液相色谱法的基本原理;色谱系统适用性试验的主要内容;气相色谱法和高效液相色谱法在药物鉴别、检查和含量测定中的应用。了解气相色谱仪和高效液相色谱仪的基本结构。

　　一、气相色谱法： 以气体为流动相的色谱法，具有分离效能高、灵敏度高、样品用量少、分析速度快等优点，不适用于难挥发和热稳定性差的物质分析。

　　(一)基本原理

　　1.基本概念

　　色谱峰参数：峰高或峰面积(用于定量)，峰位(保留值表示，用于定性)，峰宽(用于衡量柱效)

　　保留值：保留时间、死时间、调整保留时间

　　峰宽：标准差、半峰宽、峰宽

　　2.塔板理论：把组分在两相间的连续转移过程，分解为间歇的在单个塔板中的分配平衡过程

　　理论塔板数 n=5.54(tR/Wh/2)2

　　色谱柱的理论塔板数越多，柱效越高;同样长度中塔板高度越小，柱效越高。

　　3.速率理论：主要说明使色谱峰扩张而降低柱效的因素

　　范氏方程 H=A+B/μ+Cμ

　　A为涡流扩散项。采用适当粒度、均匀的填料并填充均匀可减小涡流扩散，开管毛细管柱A=0

　　B为纵向扩散系数。为减小纵向扩散可采用较高的载气流速;或选择分子量大的重载气;也可降低柱温。

　　C为传质阻抗系数。在能完全覆盖载体表面的前提下，应适当减少固定液用量。

　　范氏方程说明填充均匀程度、载体粒度、载气种类、载气流速、柱温、固定液层厚度对柱效的影响。

　　(二)气相色谱仪

　　1.气源：FID常用载气多为氮气或氦气;TCD多用氦气或氢气为载气;ECD多用氮气或氩气

　　2.进样及汽化系统

　　3.色谱柱和柱温箱

　　4.检测器

　　热导检测器TCD：浓度型检测器。构造简单、测定范围广、样品不破坏，但灵敏度较低。

　　电子捕获检测器ECD：灵敏度高、选择性好。对无电负性基团的化合物响应低。

　　氢离子火焰检测器FID：质量型检测器。灵敏度高、响应快、线性范围宽，最常用。

　　(三) 应用 1.鉴别：利用保留值进行鉴别。

　　2.检查

　　(1) 内标法加校正因子测定供试品中某个杂质含量

　　(2) 外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量

　　(3) 加校正因子的主成分自身对照法

　　(4) 不加校正因子的主成分自身对照法

　　(5) 面积归一化法：一般不用于微量杂质检查

　　3.含量测定：外标法，内标法

　　内标物要求：①原样品中不含有的组分;②保留时间与待测组分相近，但能完全分离;③纯度合乎要求。

　　二、高效液相色谱法

　　(一)速率理论：高效液相色谱法中影响柱效主要因素为涡流扩散项和传质阻抗项。由于液体黏度比载气大得多，而且柱温多为室温，其纵向扩散项很小，可忽略不计。范氏方程简化为 H=A +Cμ

　　(二) 高效液相色谱仪： 1.高压输液泵 2.色谱柱：分析型和制备型 3.进样阀 4.检测器：①固定波长检测器;②可变波长检测器;③光二极管阵列检测器

　　(三)应用：与气相色谱法相似

　　三、色谱系统适用性试验方法

　　1.理论塔板数：不得低于各品种项下规定的最小理论塔板数

　　2.分离度：除另有规定外，分离度应大于1.5

　　3.重复性：取各品种项下对照品2连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差不大于2.0%

　　4.拖尾因子：除另有规定外，拖尾因子应在0.95～1.05之间