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执业药师《药物分析学》章节知识点:第六章色谱法

来源 :中华考试网 2016-11-08

  第二节 气相色谱法和高效液相色谱法

  掌握气相色谱法和高效液相色谱法的基本原理;色谱系统适用性试验的主要内容;气相色谱法和高效液相色谱法在药物鉴别、检查和含量测定中的应用。了解气相色谱仪和高效液相色谱仪的基本结构。

  一、气相色谱法: 以气体为流动相的色谱法,具有分离效能高、灵敏度高、样品用量少、分析速度快等优点,不适用于难挥发和热稳定性差的物质分析。

  (一)基本原理

  1.基本概念

  色谱峰参数:峰高或峰面积(用于定量),峰位(保留值表示,用于定性),峰宽(用于衡量柱效)

  保留值:保留时间、死时间、调整保留时间

  峰宽:标准差、半峰宽、峰宽

  2.塔板理论:把组分在两相间的连续转移过程,分解为间歇的在单个塔板中的分配平衡过程

  理论塔板数 n=5.54(tR/Wh/2)2

  色谱柱的理论塔板数越多,柱效越高;同样长度中塔板高度越小,柱效越高。

  3.速率理论:主要说明使色谱峰扩张而降低柱效的因素

  范氏方程 H=A+B/μ+Cμ

  A为涡流扩散项。采用适当粒度、均匀的填料并填充均匀可减小涡流扩散,开管毛细管柱A=0

  B为纵向扩散系数。为减小纵向扩散可采用较高的载气流速;或选择分子量大的重载气;也可降低柱温。

  C为传质阻抗系数。在能完全覆盖载体表面的前提下,应适当减少固定液用量。

  范氏方程说明填充均匀程度、载体粒度、载气种类、载气流速、柱温、固定液层厚度对柱效的影响。

  (二)气相色谱仪

  1.气源:FID常用载气多为氮气或氦气;TCD多用氦气或氢气为载气;ECD多用氮气或氩气

  2.进样及汽化系统

  3.色谱柱和柱温箱

  4.检测器

  热导检测器TCD:浓度型检测器。构造简单、测定范围广、样品不破坏,但灵敏度较低。

  电子捕获检测器ECD:灵敏度高、选择性好。对无电负性基团的化合物响应低。

  氢离子火焰检测器FID:质量型检测器。灵敏度高、响应快、线性范围宽,最常用。

  (三) 应用 1.鉴别:利用保留值进行鉴别。

  2.检查

  (1) 内标法加校正因子测定供试品中某个杂质含量

  (2) 外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量

  (3) 加校正因子的主成分自身对照法

  (4) 不加校正因子的主成分自身对照法

  (5) 面积归一化法:一般不用于微量杂质检查

  3.含量测定:外标法,内标法

  内标物要求:①原样品中不含有的组分;②保留时间与待测组分相近,但能完全分离;③纯度合乎要求。

  二、高效液相色谱法

  (一)速率理论:高效液相色谱法中影响柱效主要因素为涡流扩散项和传质阻抗项。由于液体黏度比载气大得多,而且柱温多为室温,其纵向扩散项很小,可忽略不计。范氏方程简化为 H=A +Cμ

  (二) 高效液相色谱仪: 1.高压输液泵 2.色谱柱:分析型和制备型 3.进样阀 4.检测器:①固定波长检测器;②可变波长检测器;③光二极管阵列检测器

  (三)应用:与气相色谱法相似

  三、色谱系统适用性试验方法

  1.理论塔板数:不得低于各品种项下规定的最小理论塔板数

  2.分离度:除另有规定外,分离度应大于1.5

  3.重复性:取各品种项下对照品2连续进样5次,除另有规定外,其峰面积测量值的相对标准偏差不大于2.0%

  4.拖尾因子:除另有规定外,拖尾因子应在0.95~1.05之间

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