第二十章　不发酵菌及检验

　　(不发酵G-杆菌)

　　本章内容

　　概述

　　假单胞菌属

　　(一)铜绿假单胞菌

　　(二)嗜麦芽窄食单胞菌

　　不动杆菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属

　　军团菌属

　　不发酵菌概述

　　不发酵或仅氧化形式利用葡萄糖的革兰阴性无芽胞杆菌;大部分为专性需氧菌。

　　包括13个属。大多为条件致病菌。

　　除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。

　　氧化-发酵(O-F)试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。

　　麦康凯琼脂上：假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。

　　假单胞菌属

　　铜绿假单胞菌——生物学特性

　　形态与结构

　　形态：细长杆菌。

　　染色：G-。

　　特殊结构：无芽胞，无荚膜。有1～3根鞭毛，运动活泼。

　　培养特性

　　营养要求：不高。

　　气体环境：专性需氧。

　　温度环境：最适35℃，4℃不生长。

　　菌落特点：

　　普通琼脂平板：圆形大小不一，边缘不整齐、扁平、隆起、光滑湿润且常呈融合状态的菌落。

　　血液琼脂平板：扁平、湿润、有特殊气味的灰绿色或蓝绿色菌落，有金属光泽;周围有透明溶血环。

　　选择培养基：(麦康凯琼脂培养基)微小无光泽半透明菌落，48h菌落中心常呈棕绿色。(SS琼脂培养基)类似沙门菌的菌落，稍久菌落可呈棕绿色。

　　产生的主要色素：①绿脓素，为蓝绿色，无荧光性;②绿色荧光素。

　　铜绿假单胞菌——微生物检验及鉴定

　　标本采集：根据病情采集相应的临床标本。

　　形态学检查

　　分离培养：

　　依据菌落特征、色素(约10%菌株不产生色素)、气味等以及涂片染色结果。

　　生化试验(鉴定)

糖类发酵试验	氧化酶试验	触酶试验	硝酸盐还原试验	明胶液化试验	尿素水解试验	吲哚试验	枸橼酸盐利用试验	硫化氢试验
分解葡萄糖、木糖，产酸不产气	+	+	+	+	+	-	+	-

　　耐药性

　　具有多重耐药。初代敏感的菌株在治疗3～4d后可能发生耐药。亚胺培南耐药主要原因之一是产生金属酶。

　　铜绿假单胞菌——致病性及临床意义

　　俗称绿脓杆菌。是医院感染的主要病原体之一。

　　引起的局部感染常见于烧伤或创伤后，亦可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎和下呼吸道感染，甚至引起心内膜炎、肺炎，严重者可引起败血症，死亡率甚高。

　　假单胞菌属

　　嗜麦芽窄食单胞菌

　　革兰阴性杆菌。

　　端鞭毛1～8根，有动力、无芽胞、无荚膜。

　　菌落不溶血，有黄色素。

　　氧化酶阴性，葡萄糖缓慢氧化，可水解七叶苷、液化明胶、DNA酶阳性并可使赖氨酸脱羧。

　　不动杆菌属

　　球杆状，并成对排列，可单个存在。

　　无芽胞、无鞭毛。

　　专性需氧菌。

　　“三阴”：即氧化酶阴性，硝酸盐还原试验阴性和动力阴性。

　　临床重要的为醋酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌和洛菲不动杆菌。

　　产碱杆菌属

　　G-短杆菌，有时呈弧状，单个、成对或链状排列。

　　无芽胞，多数菌株无荚膜，本菌属菌为周毛菌。

　　需氧，液体培养基中浑浊生长，表面形成菌膜，管底形成黏液沉淀;含有蛋白胨的肉汤中产氨，使pH上升可至8.6;普通培养基上生长良好。

　　氧化酶、触酶均阳性，不分解糖类，O/F培养基中呈碱性反应，尿素、硫化氢、吲哚、明胶液化均阴性。

　　人肠道及皮肤正常菌群、条件致病菌，引起医院感染。

　　黄杆菌属

　　G-杆菌。

　　无动力、无芽胞、无荚膜。

　　血平板上典型菌落呈淡黄色、黄色或棕黄色。

　　氧化酶、触酶、磷酸酶阳性。

　　芳香黄杆菌、脑膜炎败血性黄杆菌较常见。

　　莫拉菌属

　　G-杆菌，具有多形性。

　　营养要求较高，最适生长温度为32～35℃。

　　氧化酶阳性，触酶阳性，无动力，不分解任何糖类，吲哚试验阴性。

　　可从人类或温血动物体内检出。是导致中耳炎、鼻窦炎、支气管炎和肺炎的病原体。

　　军团菌属——生物学特性

　　形态与结构

　　形态：杆菌。

　　染色：G-;常规染色不易着色。

　　特殊结构：有端生或侧生鞭毛。无芽胞、无荚膜、有菌毛。

　　培养特性

　　营养要求：苛刻。

　　气体环境：专性需氧。

　　在含有2.5%～5% CO2环境中生长良好。

　　温度环境：最适36℃。

　　菌落特点：初次分离需L-半胱氨酸，培养基中含铁盐可促进生长。

　　活性炭-酵母浸出液琼脂(BCYE)培养基：培养3～5d形成圆形，凸起、灰白色、有光泽的菌落。

　　抗原

　　具有0、H抗原，H抗原无特异性，0抗原具有特异性。

　　抵抗力

　　人工管道的水源中常存在此菌，如医院空调冷却水中常有此菌，对常用化学消毒剂敏感。

　　军团菌属——微生物检验及鉴定

　　标本采集：下呼吸道分泌物、胸水、肺组织及血液等。

　　形态学检查：意义不大。

　　分离培养：培养难度大。

　　分离培养后的菌落进行革兰染色镜检，进行生化试验。也可利用PCR技术及荧光抗体染色进行鉴定。

　　生化试验(鉴定)

糖类发酵试验	氧化酶试验	触酶试验
不分解糖类	部分+	+

　　血清学诊断

　　检测军团菌抗体IgG、IgM。

　　军团菌属——致病性及临床意义

　　可引起军团病，主要由嗜肺军团菌导致。

　　轻症型类似流感，患者有发热、头痛、无力等症状。重症型是以肺部感染为主要特征，常导致多器官损害，最终导致呼吸衰竭死亡。

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