第十八章　需氧/兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验

　　本章内容

　　一、棒状杆菌属

　　(一)白喉棒状杆菌

　　(二)其他棒状杆菌(类白喉棒状杆菌)

　　二、芽胞杆菌属

　　(一)炭疽芽胞杆菌

　　(二)蜡样芽胞杆菌

　　三、产单核李斯特菌

　　四、丹毒丝菌属(红斑丹毒丝菌)

　　五、阴道加特纳菌

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　　棒状杆菌属

　　·G+杆菌，菌体一端或两端膨大呈棒状，故名棒状杆菌。

　　·着色不匀，有异染颗粒。

　　·无鞭毛、无荚膜、无芽胞。

　　·需氧，营养要求较高。

　　·能分解一些糖类，产酸不产气。

　　·种类较多，有白喉棒状杆菌、假白喉棒状杆菌、干燥棒状杆菌、溃疡棒状杆菌等。引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，其他大多数为条件致病菌。

　　白喉棒状杆菌——生物学特性

　　·形态与结构

　　形态：细长微弯，一端或两端膨大。

　　排列：散在L、V、Y字形及不规则栅栏状。

　　特殊结构：无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。

　　革兰染色：阳性。

　　亚甲蓝染色：深浅相间节段或着色较深的颗粒。

　　Neisser染色：菌体染成黄褐色，颗粒染成紫黑色。

　　Albert染色：菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。

　　·培养特性

　　营养要求：较高。

　　气体环境：需氧或兼性厌氧。

　　温度环境：35～37℃;pH7.2～7.8。

　　菌落特征：普通培养基上生长不良，形态不典型。

　　吕氏血清斜面培养基：生长迅速，10～18h形成灰白色、湿润、S型菌落。异染颗粒明显。

　　亚碲酸钾血琼脂：菌落呈黑色。

　　白喉棒状杆菌——微生物检验及鉴定

　　·标本采集：若需培养，应在使用抗生素或其他抗菌药物前用无菌长棉拭子，从可疑的伪膜边缘采集分泌物，或采集鼻咽部或扁桃体黏膜上的分泌物。如不能立即送检，应将标本浸于无菌生理盐水或15%甘油盐水中保存。

　　·形态学检查：革兰染色和异染颗粒染色(奈瑟法或阿培特法)。镜检如见革兰阳性形态典型的棒状杆菌，在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，和菌体着色不均匀，称为异染颗粒。这是白喉棒状杆菌的形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。

　　·分离培养

　　·生化试验

糖类发酵试验	硝酸盐还原试验	明胶液化试验	吲哚试验	尿素分解试验
分解葡萄糖、麦芽糖、果糖、半乳糖，不分解乳糖、蔗糖；产酸不产气	+	-	-	-

　　·毒力试验：可作为鉴定致病菌株的重要依据。体外法有双向琼脂扩散法、SPA协同凝集试验、对流免疫电泳;体内法可用豚鼠作毒素中和试验。

　　白喉棒状杆菌——致病性及临床意义

　　·致病物质

　　白喉外毒素：抗原性强，毒性剧烈。本菌不侵入血流，但白喉外毒素可吸收入血，引起毒血症。

　　·所致疾病

　　白喉：急性呼吸道传染病。

　　气管、支气管假膜：是白喉早期死亡的主要原因。

　　心肌炎、软腭麻痹：是白喉晚期死亡的主要原因。

　　芽胞杆菌属

　　·G+大杆菌。

　　·大多数菌种在有氧环境下形成芽胞。有动力。

　　·非抗酸性。需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好。

　　·广泛分布于自然界，绝大多数为腐生菌，许多菌种成为实验室等环境的污染菌。少数寄生于动物或昆虫并对人类及动物致病，其中炭疽杆菌是人畜共患的重要致病菌，蜡样芽胞杆菌能致食物中毒。

　　炭疽芽胞杆菌——生物学特性

　　·形态与结构

　　形态：两端齐平，呈竹节状。

　　排列：组织内生长呈单个或短链，试管内可形成长链。

　　大小：致病菌中最大的革兰阳性杆菌。

　　染色：G+。

　　特殊结构：

　　无鞭毛，机体内或含血清培养基上可形成荚膜。

　　人工培养或在外界环境中易产生芽胞，形状椭圆，位于菌体中央，其直径小于菌体。

　　·培养特性

　　营养要求：一般。

　　气体环境：需氧或兼性厌氧。

　　温度环境：37℃，pH7.0～7.4。

　　菌落特征：可用2%兔血清肉汤增菌。

　　(血)琼脂平板：形成灰白色、不透明、无光泽、边缘不整齐、大而扁平的粗糙型菌落，低倍镜下观察呈卷发状。轻微溶血。

　　碳酸氢钠琼脂平板：置5%CO2环境中37℃24h后，有毒株形成黏稠有光泽的黏液型(M型)菌落(有荚膜菌体);无毒株粗糙型菌落(R型)。

　　·抗原

　　①菌体多糖抗原;

　　②荚膜多肽抗原;

　　③芽胞抗原;

　　④炭疽毒素抗原。

　　·抵抗力

　　本菌芽胞体抵抗力很强，在干燥土壤或皮毛中常温下可存活数十年。一般对碘及氧化剂较敏感。

　　炭疽芽胞杆菌——微生物检验及鉴定

　　·标本采集：根据不同感染部位取材;各型炭疽均可采取血液。专门防护的实验室，并对用过的器具、检材等进行严格的消毒处理。

　　·形态学检查：革兰染色和荚膜染色。镜检发现有荚膜的革兰阳性竹节状大杆菌。荚膜荧光抗体染色，链状或竹节状大杆菌周围有发荧光的荚膜者为阳性。

　　·分离培养：污染严重的标本可预先加热至65℃30min杀灭杂菌，或接种炭疽杆菌选择培养基-喷他脒(戊烷脒)血琼脂平板，菌落特征与血平板培养基的生长相似，但菌落较小。

　　·生化试验

糖类发酵试验	硫化氢 试验	明胶液 化试验	吲哚 试验	动力 试验
分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，不分解乳糖；产酸不产气	-	+	-	-

　　·其他试验

　　①串珠试验阳性

　　②噬菌体裂解试验

　　③重碳酸盐毒力试验菌落呈M型

　　④青霉素抑制试验

　　⑤植物凝集素试验

　　⑥动物试验

　　炭疽芽胞杆菌——致病性及临床意义

　　·致病物质：荚膜及炭疽毒素。

　　·所致疾病

　　炭疽病：

　　炭疽芽胞杆菌经皮肤、呼吸道和胃肠道侵入机体引起。人畜共患的急性传染病。临床类型有皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽，病死率很高。感染后可获得持久免疫力。

　　蜡样芽胞杆菌

　　·G+大杆菌;呈链状排列。

　　·芽胞位于菌体中心或次末端不突出菌体。

　　·能耐受100℃30min。

　　·营养要求不高，菌落较大，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，故名蜡样杆菌。β-溶血。

　　·可致食物中毒，有腹泻型与呕吐型之分。

　　产单核李斯特菌——生物学特性

　　·形态与结构

　　形态：偶呈丝状。

　　排列：呈V字形或成对排列。

　　染色：幼龄菌呈G+，陈旧培养物多转为G-。

　　特殊结构：有鞭毛、无芽胞，20℃有动力，37℃动力缓慢，一般不形成荚膜。

　　·培养特性

　　营养要求：一般。

　　气体环境：需氧或兼性厌氧。

　　温度环境：能生长于4℃。

　　·菌落特征：

　　咽喉拭子、组织及粪便接种于肉汤培养基中，置4℃冷增菌。

　　血标本或脑脊液离心沉淀物接种脑心浸液培养基，分别置10%CO237℃培养24～48h及4℃培养增菌。

　　血琼脂平板：形成小而透明的S型菌落，周围有狭窄的β溶血环。

　　半固体培养基：25℃培养时显示有动力，倒伞形生长。

　　·抗原

　　根据菌体及鞭毛抗原的不同，可分4个血清型。

　　抵抗力

　　耐碱不耐酸。对热较为敏感，加热50℃10分钟可死亡。

　　产单核李斯特菌——微生物检验及鉴定

　　·标本采集：根据感染部位不同而采取相应标本。如全身感染采取血液，局部采取分泌物或脓液，感染动物则用组织匀浆。

　　·形态学检查

　　·分离培养

　　·生化试验

糖类发酵试验	硫化氢试验	触酶试验	硝酸盐还原试验	CAMP 试验	吲哚试验	尿素水解试验	七叶苷水解试验
发酵多种糖类，不发酵甘露醇和木糖	-	+	-	+	-	-	+

　　·致病物质：溶血素样外毒素;磷脂酶。

　　·所致疾病

　　由带菌动物或人粪便污染动物制品，而经口感染。

　　通过胎盘或产道感染新生儿是本病的重要特点。宫内感染常可导致流产、死胎及新生儿败血症，死亡率较高。

　　本菌常伴随EB病毒引起传染性单核细胞增多症，此外可引起脑膜炎。

　　红斑丹毒丝菌

　　·G+杆菌，单个存在或形成短链。

　　·无芽胞、无鞭毛、无荚膜。

　　·厌氧或微需氧菌，初次分离要在厌氧环境中培养。

　　·血琼脂平板：两种菌落。光滑型菌落细小、圆形、突起有光泽;粗糙型菌落大，表面呈颗粒状。

　　·对湿热及化学消毒剂敏感。

　　·48h发酵葡萄糖、乳糖，产酸不产气;H2S阳性;触酶、氧化酶、动力阴性。

　　·引起丹毒丝菌病，以局部感染为主，全身感染少见。

　　阴道加特纳菌

　　·多形性。

　　·新鲜标本分离菌株G+，保存菌株G-。

　　·无芽胞、无荚膜、无鞭毛。

　　·营养要求较高。在5%人血平板上，在3%～5%CO2、35℃培养48h，可形成针尖大小菌落，出现β溶血环。

　　·引起非淋菌性阴道炎的主要病原菌之一。

	形态结构及培养要求	菌落特征	鉴别要点	临床意义
白喉棒状杆菌	不规则栅栏状；异染颗粒。营养要求较高	吕氏血清斜面生长迅速，异染颗粒明显。 亚碲酸钾血琼脂菌落黑色	不分解乳糖；产酸不产气。毒力试验	白喉外毒素致白喉；菌体不入血，可有毒血症
炭疽芽胞杆菌	竹节状，可成长链。最大G+致病杆菌；有荚膜	有毒株黏液型、无毒株粗糙型。低倍镜下卷发状	不分解乳糖；产酸不产气。串珠试验阳性；重碳酸盐毒力试验菌落M型	荚膜及炭疽毒素致炭疽病
产单核李斯特菌	幼龄菌G+，陈旧培养物G-；有鞭毛；20℃有动力。能生长于4℃	血琼脂小而透明S型菌落，狭窄β溶血环。半固体培养基25℃倒伞形生长	不发酵甘露醇和木糖 触酶及七叶苷水解试验阳性；CAMP试验阳性	胎盘或产道感染新生儿 传单
红斑丹毒丝菌	厌氧或微需氧， 初次分离要厌氧	血琼脂光滑型、粗糙型菌落	发酵葡萄糖、乳糖，产酸不产气	丹毒丝菌病
阴道加特纳菌	多形性；新鲜G+，菌株G-。营养要求较高	人血平板有针尖菌落，β溶血环		非淋菌性阴道炎

	棒状杆 菌属	芽胞杆 菌属	李斯特 菌属	丹毒丝 菌属	加特纳 菌属
形态	棒状	杆菌有 芽胞	短杆、链 或丝状	细杆或 线状	杆菌、多形性
触酶	+	+	+	-	-
动力	-	+	+	-	-
对氧	需氧、兼性厌氧	需氧、兼性厌氧	兼性厌氧	兼性厌氧	兼性厌氧
G+Cmol%	51～65	32～69	36～38	36～40	42～44