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2020年主管检验技师《微生物与寄生虫检验》知识点:厌氧性细菌及检验

来源 :中华考试网 2020-07-21

第十七章 厌氧性细菌及检验

  一、概述

  厌氧菌的分类

  厌氧菌的临床意义

  厌氧菌感染

  厌氧菌标本的采集与送检

  厌氧菌的分离与鉴定

  厌氧环境的指示

  二、常见厌氧菌

  破伤风杆菌

  产气荚膜梭菌

  肉毒梭菌

  艰难梭菌

  厌氧球菌

  无芽胞厌氧菌

  厌氧菌概述

  一大群专性厌氧,必须在无氧环境中才能生长的细菌。

  G+有芽胞的梭菌:有芽胞,抵抗力强,广泛存在,可出芽繁殖,产生多种外毒素,引起严重疾病。

  G+/G-无芽胞的球菌与杆菌:人体正常菌群,可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。致病性属条件致病性的内源性感染。

  厌氧菌概述——分类

  《伯杰系统细菌学手册》分类标准:

  无芽胞厌氧菌有40多个菌属,300多个菌种和亚种;而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属,包括130个种。

  据耐氧性分类

  (1)专性厌氧菌:是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。又分为极度厌氧菌(氧分压<0.5%,空气中暴露10min致死,如丁酸弧菌)和中度厌氧菌(氧分压为2%~8%,空气中暴露60~90min能生存,如大多数人类致病厌氧菌)。

  (2)微需氧菌:能在含5%~10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌,如弯曲菌属。

  (3)耐氧菌:其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。一旦生长,暴露数小时仍不死亡,如第三梭菌、溶组织梭菌。

  厌氧菌概述——临床意义及感染

  感染类型

  外源性感染:梭状芽胞杆菌属引起的感染。

  内源性感染:无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群,属于条件致病菌,在一定条件下可引起感染,一般不在人群中传播。

  感染的危险因素:

  组织缺氧缺血;

  机体免疫功能下降;

  某些手术及创伤易发生厌氧菌感染;

  长期应用某些抗菌药物;

  深部需氧菌感染。

  感染的临床指征:

  感染局部产生大量气体;

  多发生在黏膜附近;

  深部外伤后继发感染;

  分泌物有恶臭或为暗红色;

  常见于长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例;

  镜检有细菌,常规培养阴性。

  厌氧菌概述——标本的采集与送检

  重要原则:标本绝对不能被正常菌群所污染;应尽量避免接触空气。

适宜标本

血液、骨髓、脑脊液、关节液、心包液、胸腔积液、腹腔液、胆汁、由活检或尸体解剖获得的组织标本、深部脓肿抽取物、经环甲膜以下或肺穿刺抽取的肺渗出物、后穹窿穿刺抽取的盆腔渗出液及无菌套管抽取的宫腔内容物、膀胱穿刺液及其它组织穿刺液等

不宜标本

鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠拭子、喀出的痰液、自然排出的尿液和导出的尿液、流出的脓液、接近皮肤或黏膜的分泌物、阴道分泌物、胃和小肠内容物、粪便(艰难梭菌除外)等

  厌氧菌概述——标本的采集与送检

  采集

  多采用针筒抽取、穿刺等,应严格无菌操作,严禁接触空气。

  厌氧培养最理想的检查材料是组织标本,因厌氧菌在组织中比在渗出物中更易生长。

  送检

  针筒运送:液体标本。

  无菌小瓶运送:液体标本。

  棉拭子运送:需使用特制运送培养基。

  厌氧罐/厌氧袋运送:较大组织块或床边接种的培养皿等。

  标本送到实验室后,应在20~30min内处理完毕,最迟不超过2h。如不能及时接种,应室温保存。

  厌氧菌概述——分离与鉴定

  直接镜检

  根据形态和染色性,结合标本性状与气味,初步对标本中可能有的细菌作出估计。

  分离培养

  初代培养和次代培养两个阶段。

  初代培养的一般原则:

  (1)先将标本涂片染色直接镜检,指导培养基的选择;

  (2)尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基;

  (3)最好多选1~2种覆盖面不同的选择性培养基;

  (4)尽量保证培养基新鲜;

  (5)要考虑到微需氧菌存在的可能。

  非选择培养基:心脑浸液琼脂(BHI)、布氏琼脂(BR)、胰豆胨肝粉琼脂(GAM)、胰胨酵母琼脂(EG)、CDC厌氧血琼脂等。

  选择培养基:KVLB血平板(即上述非选择培养基中加卡那霉素和万古霉素),KVLB冻溶血平板(产黑素类杆菌早期产生黑色素),七叶苷胆汁平板(BBE,用于脆弱类杆菌),FS培养基(梭杆菌选择培养基),卵黄(EYA)及兔血平板(RBA)(用于产气荚膜梭菌),CCFA培养基(艰难梭菌选择培养基)等。

  分离培养

  每份标本至少接种3个血平板,分别置于有氧,无氧及5%~10% CO2环境中培养,以便正确地培养出病原菌,从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。

  厌氧培养法

  (1)厌氧罐培养法

  (2)气袋法

  (3)气体喷射法

  (4)厌氧手套箱培养法

  (5)其他培养法

  鉴定试验

  1.形态、染色

  2.菌落性状

  3.抗生素敏感性鉴定试验:常用卡那霉素及甲硝唑。

  4.生化特性:主要包括糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂肪酸酶试验、蛋白溶解试验、明胶液化试验、胆汁肉汤生长试验以及硫化氢试验等。

  5.气-液相色谱:分析厌氧菌的终末代谢产物。

  厌氧状态的指示

  1.化学法:亚甲蓝和刃天青。

  无氧时均呈白色,有氧时亚甲蓝呈蓝色,刃天青呈粉红色。

  2.微生物法:专性需氧菌。

  破伤风杆菌——生物学特性

  形态与结构

  形态:细长;呈鼓槌状。

  染色:G+;培养48h后,尤其芽胞形成后易转变为G-。

  特殊结构:有周鞭毛,无荚膜;芽胞在菌体顶端,呈圆形。

  破伤风杆菌——生物学特性

  培养特性

  营养要求:较高。

  气体环境:专性厌氧菌。

  菌落特征:

  普通培养基上不易生长。

  血平板:37℃ 48h形成扁平、灰白色、半透明、边缘不齐的菌落。

  疱肉培养基:肉渣部分消化,微变黑。

  抗原

  有菌体(O)抗原和鞭毛(H)抗原。鞭毛抗原有型特异性,可分为10个血清型。各型菌所产生的毒素的生物活性与免疫活性均相同,可被任何型的抗毒素中和。

  抵抗力

  繁殖体的抵抗力与其他细菌相似,但芽胞体抵抗力非常强。

  破伤风杆菌——微生物检验及鉴定

  破伤风的临床表现典型,根据临床症状即可作出诊断,所以一般不做细菌学检查。

  (1)特殊需要时,可从病灶处取标本涂片,革兰染色镜检。

  (2)需要培养时,将标本接种血平板、疱肉培养基培养。

  (3)生化试验:

糖类发酵试验

H2S试验

明胶液化试验

硝酸盐还原试验

吲哚试验

-

+

+

-

+

  (4)也可进行动物试验。

  破伤风杆菌——致病性及临床意义

  所致疾病:破伤风。

  产气荚膜梭菌——生物学特性

  形态与结构

  形态:粗大杆菌。

  染色:G+。

  特殊结构:

  无鞭毛;在机体内可形成明显的荚膜。

  芽胞呈椭圆形,次极端。体内不形成芽胞,体外培养也很少形成芽胞,只有在无糖培养基上方可形成。

  培养特性

  营养要求:较高。

  气体环境:不严格厌氧菌。

  温度环境:20~50℃均能生长,最适温度为45℃。

  菌落特征:取坏死组织制成悬液,接种血平板,多数菌株有双层溶血环。

  疱肉培养基:可分解肉渣中的糖类而产生大量气体。

  牛乳培养基:能分解乳糖产酸,使酪蛋白凝固,同时产生大量气体,出现“汹涌发酵”现象。

  产气荚膜梭菌——微生物检验及鉴定

  (1)直接涂片镜检:在创口深部取材涂片,革兰染色镜检。

  (2)分离培养及鉴定:可取坏死组织制成悬液,接种血平板或疱肉培养基中厌氧培养,取培养物涂片镜检,利用生化反应进行鉴定。

  (3)生化试验:

糖类发酵试验

H2S试验

明胶液化试验

卵磷脂酶试验

分解多种糖类,产酸产气

+

+

+

  产气荚膜梭菌——致病性及临床意义

  致病物质:

  外毒素:α毒素为主,本质为卵磷脂酶。

  侵袭酶类:透明质酸酶、DNA酶等。

  所致疾病:

  气性坏疽:组织坏死、水肿胀气、全身中毒。

  食物中毒:某些A型菌株产生的肠毒素引起,可自愈。

  肉毒梭菌——生物学特性

  形态与结构

  形态:短粗;呈汤匙状或网球拍状。

  染色:G+。

  特殊结构:

  有周鞭毛,无荚膜。

  芽胞呈椭圆形,粗于菌体,位于次极端。

  培养特性

  营养要求:一般。

  气体环境:严格厌氧。

  菌落特征:可在普通琼脂平板和血平板上生长。

  血平板:β溶血。

  疱肉培养基:消化肉渣使之变黑,有腐败恶臭。

  抗原

  根据所产生毒素的抗原性不同,肉毒梭菌可分为8个型,引起人类疾病的以A、B型最为常见。

  抵抗力

  芽胞体抵抗力很强。肉毒毒素对酸的抵抗力比较强,可在胃液24h不被破坏,可被胃吸收。但肉毒毒素不耐热,煮沸1min即可被破坏。

  肉毒梭菌——微生物检验及鉴定

  (1)直接涂片镜检

  (2)分离培养及鉴定

  (3)生化试验:

糖类发酵试验

H2S试验

明胶液化试验

脂酶试验

吲哚试验

分解葡萄糖麦芽糖

+

+

+

-

  (4)肉毒毒素检测:可取培养滤液或悬液上清注射小鼠腹腔,观察动物出现的中毒症状。

  肉毒梭菌——致病性及临床意义

  致病物质

  肉毒毒素:毒性强(毒性最强的细菌毒素),导致肌肉麻痹。

  所致疾病

  食物中毒:属单纯性毒性中毒,并非细菌感染。胃肠症状很少见,主要表现为某些部位的肌肉麻痹,重者可死于呼吸困难与衰竭。

  婴儿肉毒病

  艰难梭菌——生物学特性

  形态与结构

  形态:粗长杆菌。

  染色:G+。

  特殊结构:

  有鞭毛,无荚膜,次极端有卵圆形芽胞。

  艰难梭菌——微生物检验及鉴定

  分离培养困难:严格厌氧;需特殊培养基。

  CCFA平板上菌落:黄色,粗糙型。

  在紫外线照射下呈黄绿色荧光。

  生化试验

糖类发酵试验

H2S试验

卵磷脂酶试验

脂酶试验

吲哚试验

分解葡萄糖果糖

-

-

-

-

  临床上一般不采用分离培养病原菌的方法。

  通过临床表现及细胞毒素试验阳性检测来进行诊断。

  艰难梭菌——致病性及临床意义

  致病物质

  毒素A:肠毒素。可使肠壁出现炎症,通透性增加,出血及坏死。

  毒素B:细胞毒素。直接损伤肠壁细胞,因而导致腹泻及假膜形成。

  本菌感染与大量使用抗生素有关,如阿莫西林、头孢菌素和克林霉素等,其中以克林霉素尤为常见。

  所致疾病

  伪膜性肠炎:重症患者水样便中可出现斑片状假膜。

  抗生素相关性腹泻

  G+厌氧杆菌有7个属

 

形态

特殊结构

培养特性

临床意义

丙酸杆菌属

无鞭毛

普通培养基

正常菌群
条件致病菌
内源性感染

双歧杆菌属

多形性有分枝

无鞭毛
无荚膜

严格厌氧
耐酸

优杆菌属

多形

 

严格厌氧
生长缓慢

乳杆菌属

细长

无荚膜
无鞭毛

专性厌氧
兼性厌氧
微需氧

  厌氧性球菌——分类

  G-厌氧球菌:3个属,以韦荣菌属最重要。为咽喉部主要厌氧菌。

  G+厌氧球菌:5个属,有临床意义的是消化球菌属、消化链球菌属。

  无芽胞厌氧菌——临床意义

  人体的正常菌群,条件致病引起内源性感染。所致疾病有:

  1.败血症 主要由脆弱类杆菌引起。

  2.中枢神经系统感染 主要由G-厌氧杆菌引起。

  3.口腔与牙齿感染 主要由消化链球菌等引起。

  4.呼吸道感染 主要由坏死梭杆菌、消化链球菌和脆弱类杆菌等引起。

  5.腹部和会阴部感染 主要由脆弱类杆菌引起。

  6.女性生殖道感染 主要由消化链球菌、普雷沃菌等引起。

  7.其他 无芽胞厌氧菌尚可引起皮肤和软组织感染、心内膜炎等。

 

芽胞厌氧菌(梭菌属)

无芽胞厌氧菌

形态染色

G+大杆菌,有芽胞

G+/G-,球菌/杆菌

存在部位

土壤/人和动物肠道

正常菌群

分离培养

厌氧培养

厌氧培养

致病条件

外源性感染
外毒素致病,特定病型
厌氧伤口/消化道

内源性感染
条件致病,无特定病型
多为化脓性感染

微生物学检查

特定病型可诊断

必须,药敏试验

防治原则

类毒素/抗毒素/抗生素

防止感染条件发生,药敏指导下使用抗生素

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