第十三章　病原性球菌及检验

　　葡萄球菌——分类

　　按色素及生化反应

　　金黄色葡萄球菌：金黄色。

　　表皮葡萄球菌：白色。

　　腐生葡萄球菌：柠檬色。

　　按血浆凝固酶

　　凝固酶阳性葡萄球菌：金黄色葡萄球菌。

　　凝固酶阴性葡萄球菌：表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。

　　葡萄球菌——生物学特性

　　形态与结构

　　形态：球形。

　　大小：0.5～1.5μm(中等)。

　　排列：葡萄状。

　　染色：G+。

　　特殊结构：无鞭毛和芽胞，个别有荚膜。

　　培养特性

　　营养要求：一般。

　　气体环境：需氧或兼性厌氧。

　　温度环境：35～37℃;pH7.4。

　　菌落特征：普通琼脂平板24～48小时培养，形成直径2～3mm、圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐不透明、色素、溶血环。

　　抗原

　　蛋白抗原：完全抗原，有种属特异性。结合在细胞壁的肽聚糖部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。

　　多糖抗原：半抗原，具有型特异性，有三种：①A型多糖抗原;②B型多糖抗原;③C型多糖抗原。

　　抵抗力：耐热，耐干燥，耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。

　　葡萄球菌——微生物检验及鉴定

　　标本采集：脓汁、渗出液、血液、尿液、粪便、痰液等。

　　形态学检查：革兰阳性球菌呈葡萄串状排列。

　　分离培养：

　　血标本肉汤增菌35℃ 24h后或脓汁、尿道分泌物、脑脊液离心沉淀物接种血琼脂平板。35℃18～24h，可见典型产生不同色素的菌落。金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明溶血环。

　　粪便、呕吐物接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂平板，经35℃ 18～24h培养，可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。

　　生化试验(鉴定)

	触酶试验	血浆凝固酶试验	甘露醇发酵试验	新生霉素敏感试验
金黄色葡萄球菌	+	+	+	+
表皮葡萄球菌	+	-		+
腐生葡萄球菌	+	-		-

　　耐药性检测：

　　苯唑西林耐药的葡萄球菌(MRS)，耐甲氧西林的金葡菌(MRSA)，耐甲氧西林的表葡菌(MRSE)，耐万古的金黄色葡萄球菌(VRSA)，耐万古的表皮葡萄球菌(VRSE)。

　　葡萄球菌——致病性及临床意义

感染类型	疾病	致病因素
侵袭性疾病（化脓性感染）	皮肤软组织感染：如毛囊炎、疖、痈等	血浆凝固酶、葡萄球菌溶血素、杀白细胞素
	全身性感染：如败血症、脓毒血症、骨髓炎、心内膜炎、脑膜炎等
	医院内感染
毒素性疾病	食物中毒，急性胃肠炎	肠毒素、表皮溶解毒素、毒性休克综合征毒素
	烫伤样皮肤综合征
	中毒性休克综合征
	葡萄球菌性肠炎（假膜性肠炎）

　　金黄色葡萄球菌：引起疖、痈、外科伤口、创伤的局部化脓性感染，播散入血后可引起深部组织的化脓性感染;其产生的肠毒素可引起食物中毒，表现为急性胃肠炎。

　　表皮葡萄球菌：皮肤正常菌群，是导致血培养污染的常见细菌。已成为医院感染的重要条件致病菌。

　　腐生葡萄球菌：导致尿路感染的常见病原菌之一。

　　链球菌——分类

　　按血琼脂平板溶血现象：

　　甲型(α)溶血性链球菌：草绿色链球菌，条件致病菌。

　　乙型(β)溶血性链球菌：溶血性链球菌，致病菌。

　　丙型(γ)链球菌：非致病菌。

　　按细胞壁抗原(C抗原)分类：A、B、C、D……共18个群，对人致病的90%为A群。

　　链球菌——生物学特性

　　形态与结构

　　形态：球形。

　　大小：0.8～1.0μm。

　　排列：链状。

　　染色：G+。

　　特殊结构：无鞭毛和芽胞，个别有荚膜。

　　培养特性

　　营养要求：较高。

　　气体环境：需氧或兼性厌氧，5% CO2最好。

　　温度环境：35～37℃;pH7.4～7.6。

　　菌落特征：血清肉汤中，溶血性菌株呈絮状或颗粒状沉淀生长。不溶血菌株均匀浑浊生长。

　　血琼脂平板上培养可形成灰白色、圆形、透明或半透明，似针尖大小、凸起，菌落周围可出现α-溶血或β-溶血，也可不出现溶血。

　　抗原性：细胞壁抗原(即C抗原)。

　　抵抗力：不强，对各种常用消毒剂敏感，60℃加热30min即可杀灭。

　　链球菌——微生物检验及鉴定

　　标本采集：脓汁、咽拭、痰、血、尿等标本。

　　形态学检查：革兰染色阳性，圆形呈链状排列。

　　分离培养：

　　血标本：肉汤培养基，分别置需氧和厌氧环境中增菌，然后接种于血平板，置需氧和厌氧环境中培养。

　　脓汁和咽拭标本：接种血平板并涂片染色镜检，见形态酷似链球菌，并革兰阳性。上述的培养物经35℃ 18～24h培养后，观察菌落特征和溶血情况。(甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌可产生α-溶血)

　　生化试验(鉴定)

	触酶试验	杆菌肽敏感试验	CAMP试验	胆汁七叶苷试验	奥普托欣试验	胆汁溶菌	马尿酸盐水解试验
A群链球菌	-	+
B群链球菌	-		+				+
D群链球菌	-			可生长
肺炎链球菌	-				敏感
甲型（α）溶血性链 球菌	-					-

　　其他试验：直接检测抗原。

　　链球菌——致病性及临床意义

　　A群、B群及肺炎链球菌是链球菌属的3种重要致病菌。

感染类型	疾病	病原菌	致病因素
急性化脓性感染	丹毒、痈、蜂窝组织炎	A群	侵袭性： 透明质酸酶 链激酶 链道酶 M蛋白
	咽炎、鼻窦炎、中耳炎
	脑膜炎、产褥热
猩红热
变态反应性疾病	风湿热和肾小球肾炎
			毒素： 链球菌溶血素 致热外毒素
其他感染	亚急性心内膜炎	草绿色链球菌（条件致病）
	新生儿肺炎、脑膜炎和败血症	B群链球菌
	呼吸道和泌尿道感染	D群链球菌

　　肺炎链球菌——生物学特性

　　形态与结构

　　形态：革兰阳性球菌。

　　大小：0.5～1.25μm。

　　排列：矛尖状，钝面成双排列，有时呈短链状。

　　染色：G+。

　　特殊结构：有荚膜，无鞭毛，无芽胞。

　　培养特性

　　营养要求：较高。

　　气体环境：需氧或兼性厌氧。

　　温度环境：35～37℃;pH7.6～8.0。

　　菌落特征：在肉汤及琼脂培养基上生长不良，在含3%～5%兔或羊血清肉汤中生长良好。在血琼脂平板上可形成灰色扁平、中心凹陷直径为0.5～1.0mm的菌落(脐窝状)，周围有草绿色溶血圈。在液体培养基中培养24h，呈均匀混浊，培养时间过长，可因自溶，培养液变澄清，管底沉淀。

　　抗原性：荚膜多糖抗原。

　　抵抗力：较弱。

　　肺炎链球菌——微生物检验及鉴定

　　标本采集

　　形态学检查：革兰阳性矛尖状双球菌。

　　分离培养：

　　血液、脑脊液经葡萄糖硫酸镁肉汤增菌后，可呈均匀混浊，而且有绿色荧光。

　　脓汁或脑脊液沉渣接种于血琼脂，置5%～10% C02环境中，经35℃ 18～24h培养后观察菌落。

　　生化试验(鉴定)

	触酶试验	动物试验	荚膜肿胀试验	奥普托欣试验	胆汁溶解	菊糖发酵试验
肺炎链球菌	-	敏感	+	敏感	+	+
甲型（α）溶血性链球菌 草绿色链球菌	-			耐药	-	-

　　肺炎链球菌——致病性及临床意义

　　致病物质：荚膜、溶血素。

　　所致疾病：大叶性肺炎、支气管炎。可继发胸膜炎、脓胸，也可引起中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎及败血症。

　　肠球菌——分类

　　粪肠球菌

　　屎肠球菌

　　……

　　肠球菌——生物学特性

　　形态与结构

　　形态：卵圆形。

　　排列：成双或短链状。

　　染色：G+。

　　特殊结构：无芽胞，无荚膜，部分有稀疏鞭毛。

　　肠球菌——生物学特性

　　培养特性

　　营养要求：高。

　　气体环境：需氧或兼性厌氧。

　　温度环境：10～45℃。

　　菌落特征：

　　血平板上主要表现为γ和α溶血(粪肠球菌的某些菌株在马血、兔血平板上出现β溶血环)。

　　能在高盐(6.5%NaCl)、高碱(pH9.6)、40%胆汁培养基上生长。

　　肠球菌——微生物检验及鉴定

　　标本采集：尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液。

　　形态学检查：革兰阳性，成双或短链状排列的卵圆形球菌，无芽胞，无荚膜。

　　分离培养：

　　血平板：γ和α溶血(粪肠球菌的某些菌株在马血、兔血平板上出现β溶血环)。

　　高盐(6.5%NaCl)、高碱(pH9.6)、40%胆汁培养基上可生长。

　　生化试验(鉴定)

　　触酶阴性。

　　胆汁七叶苷中可以生长。

　　多数肠球菌能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺(PYR)。

　　耐药试验：

　　β-内酰胺类尤其是青霉素类(如青霉素、氨苄西林)、万古霉素和氨基糖苷类(如庆大霉素)的敏感性。

　　肠球菌——致病性及临床意义

　　肠球菌是肠道正常菌群(条件致病菌)。

　　肠球菌是革兰阳性菌中仅次于葡萄球菌属的重要医院感染病原菌，其所致感染中最常见的为尿路感染，其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。

　　可引起老年人及有严重基础病患者败血症。

　　可引起腹腔感染、胆管炎及心内膜炎，脑膜炎少见。

　　临床上分离率最高的是粪肠球菌，其次是屎肠球菌。

　　奈瑟菌属——分类

　　主要有9个种。

　　其中对人致病的是脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。

　　形态与结构

　　形态：肾形。

　　大小：直径0.6～1.5μm。

　　排列：成对排列(双球菌)，坦面相对。

　　染色：G-。

　　特殊结构：无鞭毛，无芽胞，有菌毛，新分离的菌株有荚膜。

　　培养特性

　　营养要求：高，属苛养菌。

　　气体环境：专性需氧。

　　温度环境：35～37℃，pH7.4～7.6。

　　菌落特征：

　　常用血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂，初次分离需置5%～10%C02环境中，35℃培养18～24h后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径1～2mm的小菌落(露珠状)。

　　抗原：

　　分型：根据群特异性荚膜多糖抗原不同，将本菌分为A、B、C、D、X、Y、Z、1916、29E和W135等。目前，对人致病的主要是A群，偶见B群、C群及1916群引起散发病例。

　　脑膜炎奈瑟菌——微生物检验及鉴定

　　标本采集：血液、脑脊液、鼻咽分泌物等。因本菌能产生自溶酶，易自溶，故采集的标本不宜置冰箱，应立即送检。

　　形态学检查：脑脊液中性粒细胞内革兰阴性双球菌，呈肾形成对排列;有菌毛，有荚膜。

　　分离培养：

　　标本葡萄糖肉汤增菌，接种血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂，置5%～10%C02环境中，35℃培养18～24h后可见典型菌落。

　　生化试验(鉴定)

糖类发酵试验	吲哚（靛基质）试验	硫化氢试验	尿素分解试验	触酶试验	氧化酶试验	硝酸盐还原试验
分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气	-	-	-	+	+	-

　　其他实验：荚膜多糖抗原直接凝集试验阳性。

　　脑膜炎奈瑟菌——致病性及临床意义

　　脑膜炎奈瑟菌简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)的病原体。存在于携带者或病人的鼻咽部，经空气传播，冬末春初为流行高峰。

　　致病物质：

　　1.荚膜：抵抗吞噬作用，增强侵袭力。

　　2.菌毛：介导细菌黏附在易感细胞表面。

　　3.内毒素：主要致病物质。

　　淋病奈瑟菌——生物学特性

　　形态与结构

　　形态：球形或肾形。

　　大小：直径0.6～0.8μm。

　　排列：成对排列，形似咖啡豆。

　　染色：G-。

　　特殊结构：新分离的菌株有荚膜和菌毛，经人工培养后，呈卵圆形或球形，排列不规则。无芽胞和鞭毛。

　　培养特性

　　营养要求：高。

　　气体环境：专性需氧。

　　温度环境：35～37℃，pH7.5。

　　菌落特征：

　　常用血液琼脂、巧克力琼脂、EPV琼脂等培养基。初次分离时，需置5%～10%CO2条件下才能生长发育。经24～48h培养后，可见表面光滑、凸起、半透明、高亮度、直径0.5～1.0mm的圆形菌落，无色素易乳化。

　　抗原：

　　抵抗力：

　　对冷、热、干燥和消毒剂抵抗力很低。

　　淋病奈瑟菌——微生物检验及鉴定

　　标本采集：脓性分泌物，尿道拭子，宫颈口分泌物，眼结膜分泌物，血液。不宜置冰箱，应立即送检。

　　形态学检查：脓汁标本中性粒细胞内，慢性淋病时细胞外，革兰阴性双球菌。

　　分离培养：

　　采样后立即接种于预温的选择性培养基和非选择性培养基中，如巧克力平板、含有两种以上抗生素(万古霉素和多黏菌素等)的营养培养基上，置于含5%～10%的二氧化碳环境中，35℃培养48h，取小而透明似水滴状、无色素易乳化菌进一步鉴定。

　　淋病奈瑟菌——微生物检验及鉴定

　　生化试验(鉴定)

糖类发酵试验	触酶试验	氧化酶试验
仅分解葡萄糖，产酸不产气，不分解麦芽糖	+	+

　　其他实验：荧光抗体染色法、协同凝集试验;核酸探针杂交法。

　　淋病奈瑟菌——致病性及临床意义

　　常见的性传播疾病淋病的病原菌，主要通过性接触直接侵袭感染泌尿生殖道，口咽部及肛门直肠的黏膜。如单纯性淋病，盆腔炎，淋菌性结膜炎。人类是其唯一的天然宿主和传染源。

　　卡他布兰汉菌——生物学特性

　　形态与结构

　　形态：球形。

　　大小：直径0.6～1.0μm。

　　排列：成对排列，类似脑膜炎奈瑟菌。

　　染色：G-。

　　特殊结构：无芽胞和鞭毛。

　　培养特性

　　营养要求：不高。

　　气体环境：需氧。

　　温度环境：18～20℃。

　　菌落特征：普通培养基，菌落光滑，直径约1～3mm，不透明，灰白色，菌落易从培养基上刮下。

　　卡他布兰汉菌——微生物检验及鉴定

　　生化试验(鉴定)

触酶试验	氧化酶试验	硝酸盐还原试验	DNA酶试验
+	+	+	+

　　卡他布兰汉菌——致病性及临床意义

　　健康人群的上呼吸道正常菌群。

　　可导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎的病原体。

	革兰染色	形态排列	特殊结构	气体环境	温度	营养	培养基	菌落	触酶试验	抵抗力
葡萄球菌	G+	球形 葡萄状	个别有荚膜	兼性厌氧	35～37℃	一般	血琼脂，高盐甘露醇琼脂	圆形凸起光滑湿润不透明、色素溶血环	+	最强
链球菌	G+	球形 链状	个别有荚膜	兼性厌氧	35～37℃	较高	血琼脂	小圆形灰白色半透明凸起，α或β或不溶血	-	较弱
肠球菌	G+	卵圆形成双或短链	部分有鞭毛	兼性厌氧	10～45℃	高	血琼脂	圆形光滑灰白色，α-溶血	-
奈瑟菌	G-	肾形 成对	有荚膜菌毛	专性需氧	35～37℃	高	血琼脂、巧克力琼脂	圆形光滑凸起半透明	+	弱
卡他布兰汉菌	G-	球形 成对	无	专性需氧	18～20℃	不高	血琼脂	光滑，不透明，灰白色	+

	触酶试验	血浆凝固酶试验	甘露醇发酵试验	新生霉素 敏感试验
金黄色葡萄球菌	+	+	+	+
表皮葡萄球菌	+	-		+
腐生葡萄球菌	+	-		-

	触酶试验	杆菌肽敏感试验	CAMP试验	胆汁七叶苷试验	奥普托欣试验	胆汁溶菌	动物试验	荚膜肿胀试验	菊糖发酵试验
A群链球菌	-	+
B群链球菌	-		+
D群链球菌	-			可生长
肺炎链球菌	-				敏感		+	+	+
α-溶血性链球菌	-				耐药	-			-

	糖类发酵试验	触酶试验	氧化酶试验	硝酸盐还原试验	DNA酶试验
脑膜炎奈瑟菌	分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气	+	+	-
淋病奈瑟菌	仅分解葡萄糖，产酸不产气，不分解麦芽糖	+	+	-
卡他布兰汉菌		+	+	+	+

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