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2020年主管检验技师《微生物与寄生虫检验》知识点:细菌的培养与分离技术

来源 :中华考试网 2020-07-10

第九章 细菌的培养与分离技术

  本章内容

  一、基本条件

  二、细菌的接种与分离技术

  三、细菌培养的方法

  四、细菌的生长现象

  五、细菌L型的检查

  基本条件

  (一)细菌实验室:生物安全柜。

  (二)无菌实验室

  (三)基本设备和器具:温箱、CO2培养箱、厌氧培养设备;显微镜;高压蒸汽灭菌器、干烤箱;接种环和接种针;火焰灯或酒精灯;平皿、试管、吸管等玻璃器皿,以及离心机、天平等。

  细菌的接种与分离技术

  平板划线分离法:分散生长,各自形成菌落。

  连续划线法:杂菌不多。

  分区划线法:杂菌多。

  斜面接种法:单个菌落纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。

  液体接种法:多用于一些液体生化试验管的接种。

  穿刺接种法:半固体培养基,接种针。

  倾注平板法:测定牛乳、饮水和尿液等标本细菌数。 将标本适当稀释后,取一定量加入已灭菌的平皿内,再倾入已溶化并冷却至45℃左右的定量培养基,混匀,待凝固后倒置、培养。

  涂布接种法:常用于纸片法药物敏感性测定,也可用于被检标本中的细菌计数。

  细菌的培养方法

  培养条件:根据临床初步诊断及待检细菌的种类,选用不同环境条件进行培养。

  细菌的生长现象

  分离培养基上菌落的生长现象

  观察菌落的大小、形状、突起、边缘、颜色、表面、透明度等。

  血琼脂上的溶血:

  α溶血:菌落周围出现绿色环状,红细胞外形完整无缺。

  β溶血:菌落周围形成一个完全清晰透明的环,红细胞溶解。

  γ溶血:没有溶血,红细胞无溶解。

  双环:菌落周围完全溶解的晕圈外有一个部分溶血的第二圆圈。

  气味

  液体培养基中的生长现象

  肉汤培养基的混浊度、沉淀、菌膜,气味和色素等。 细菌数量达106~107CFU/ml,培养肉汤才见混浊。

  血液培养的检查和传代培养:肉眼观察其生长现象,如溶血、产生气体或混浊度等。

  半固体培养基中细菌的动力

  有动力的细菌除了在穿刺接种的穿刺线上生长外,在穿刺线的两侧均可见混浊或细菌生长的小菌落。

  细菌L型的检查

  1.标本采集:无杂菌污染的组织或体液标本应加20%蔗糖无菌溶液保持高渗;血液标本应接种高渗肉汤增菌培养。

  2.分离培养:标本接种到高渗肉汤增菌培养1~7d,然后转种L型平板和血平板37℃培养2~7d。

  3.生长现象:常有油煎蛋样菌落(典型L型菌落)、 颗粒型菌落(G型)和丝状菌落(F型)三种类型。

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