第九章　细菌的培养与分离技术

　　本章内容

　　一、基本条件

　　二、细菌的接种与分离技术

　　三、细菌培养的方法

　　四、细菌的生长现象

　　五、细菌L型的检查

　　基本条件

　　(一)细菌实验室：生物安全柜。

　　(二)无菌实验室

　　(三)基本设备和器具：温箱、CO2培养箱、厌氧培养设备;显微镜;高压蒸汽灭菌器、干烤箱;接种环和接种针;火焰灯或酒精灯;平皿、试管、吸管等玻璃器皿，以及离心机、天平等。

　　细菌的接种与分离技术

　　平板划线分离法：分散生长，各自形成菌落。

　　连续划线法：杂菌不多。

　　分区划线法：杂菌多。

　　斜面接种法：单个菌落纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。

　　液体接种法：多用于一些液体生化试验管的接种。

　　穿刺接种法：半固体培养基，接种针。

　　倾注平板法：测定牛乳、饮水和尿液等标本细菌数。 将标本适当稀释后，取一定量加入已灭菌的平皿内，再倾入已溶化并冷却至45℃左右的定量培养基，混匀，待凝固后倒置、培养。

　　涂布接种法：常用于纸片法药物敏感性测定，也可用于被检标本中的细菌计数。

　　细菌的培养方法

　　培养条件：根据临床初步诊断及待检细菌的种类，选用不同环境条件进行培养。

　　细菌的生长现象

　　分离培养基上菌落的生长现象

　　观察菌落的大小、形状、突起、边缘、颜色、表面、透明度等。

　　血琼脂上的溶血：

　　α溶血：菌落周围出现绿色环状，红细胞外形完整无缺。

　　β溶血：菌落周围形成一个完全清晰透明的环，红细胞溶解。

　　γ溶血：没有溶血，红细胞无溶解。

　　双环：菌落周围完全溶解的晕圈外有一个部分溶血的第二圆圈。

　　气味

　　液体培养基中的生长现象

　　肉汤培养基的混浊度、沉淀、菌膜，气味和色素等。 细菌数量达106～107CFU/ml，培养肉汤才见混浊。

　　血液培养的检查和传代培养：肉眼观察其生长现象，如溶血、产生气体或混浊度等。

　　半固体培养基中细菌的动力

　　有动力的细菌除了在穿刺接种的穿刺线上生长外，在穿刺线的两侧均可见混浊或细菌生长的小菌落。

　　细菌L型的检查

　　1.标本采集：无杂菌污染的组织或体液标本应加20%蔗糖无菌溶液保持高渗;血液标本应接种高渗肉汤增菌培养。

　　2.分离培养：标本接种到高渗肉汤增菌培养1～7d，然后转种L型平板和血平板37℃培养2～7d。

　　3.生长现象：常有油煎蛋样菌落（典型L型菌落）、 颗粒型菌落(G型)和丝状菌落(F型)三种类型。