五论述题

1.简述免疫金电镜染色技术的原理、技术要点和注意事项。

DA (1)原理：免疫金电镜染色技术原理是胶体金标记物与镍网上待检标本的相应蛋

白质发生结合反应，由于胶体金颗粒具有高电子密度的特性，故金标蛋白结合处，电镜下

可见黑褐色颗粒，从而对细胞膜上或细胞内的蛋白质进行定性与定位分析。

(2)技术要点：①标本包埋：用戊二醛对标本进行固定，后行锇酸固定(固定膜结

构)，丙酮或乙醇逐级脱水，包埋(Epon812树脂)，超薄切片(80nm)，置300目镍网

上;②免疫组化染色：白蛋白封闭，加第一抗体，孵育，PBS冲洗，卵白蛋白封闭，加第

二抗体(胶体金标记抗IgG抗体)，孵育，。PBS冲洗，蒸馏水冲洗，醋酸双氧铀、枸橼酸

铅复染，电镜观察。

(3)注意事项：①以上染色步骤除清洗外，皆在滴于蜡膜(封口膜)上的各种液体

小滴上进行。应注意始终保持镍网湿润，不得让任何一种液体干于网上，并要吸去镊子尖

部夹起的多余液体;②用于电镜观察的免疫金法可分为包埋前染色和包埋后染色两大类，

包埋后染色具有简便可靠，结果重复性好，能在同一组织切片上进行多重免疫染色的优

点，但会使某些抗原失活，不易保持细胞膜结构完整。