五、简答题

1.如何分离RIA中的B与F?

答：目前RIA常用的分离B与F的方法有 4 种： ① 第二抗体沉淀法 用RIA反应中试剂抗体(一抗)来源动物的 IgG免疫另一种动物，制得抗 IgG 血清(二抗) 。RIA 反应结束时，加入二抗，使其形成抗原-一抗-二抗的双抗体复合物;但因一抗含量甚微，此复合物也少，不易离心分离，一般还需加入一定量的与一抗同种动物的血清或IgG，使其与二抗形成较大量的可见沉淀物，与双抗体复合物共同沉淀;离心后，即可有效的分离B与F。也可将二抗与某些颗粒固体物相连，制成固体二抗，分离 B与F效果也好。 ② 聚乙二醇(PEG)沉淀法 PEG 能非特异地沉淀抗原抗体复合物等大分子蛋白质，而不沉淀小分子抗原。其优点是沉淀物完全且经济简便，但非特异性结合率较高，且当温度高于30℃时，沉淀物易复溶。 ③ PR 试剂法 将二抗与 PEG 按一定比例混合成悬液，是二抗法与沉淀法相结合的方法。此法保留了二者的优点，节约了二者的用量，分离迅速，简便。 ④ 活性炭吸附法 活性炭可吸附小分子游离抗原或半抗原，而大分子蛋白质(如抗体和免疫复合物)则留在溶液中。利用此原理，在反应后加入活性炭颗粒，使游离的标记抗原(F)吸附到颗粒上，再离心使颗粒沉淀，上清液中含标记抗原抗体复合物(B)供测定。该法主要用于小分子抗原或药物的测定。

2.放射免疫分析技术有何应用?其前景如何?

答：放射免疫技术由于其测定的灵敏度高，特异性强，精密度好，而且可对半抗原和抗原测

定以及测定仪器设备条件要求不高，因此广泛用于生物医学检验。常用于各种激素、微量半

抗原、肿瘤标志物、药物等微量物质的测定。

由于大多数检验项目均有 RIA 或 IRMA 试剂盒供应，目前仍是基层单位对超微量物质测定的主要手段。但由于放射污染和危害，常用核素半衰期短，试剂盒稳定期不长，以及具有不能快速、灵活的自动化分析等诸多不足，特别是近年来其他非放射标记免疫测定技术及自动化分析的飞速发展和普及，RIA将逐渐会被这些优秀的标记免疫分析方法所取代。

六、论述题

1.试述放射免疫分析与免疫放射分析。

答：放射免疫分析(RIA)是放射免疫技术最经典的模式。它是以放射性核素标记抗原与反应系统中未标记抗原竞争性结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析方法。而免疫放射分析(IRMA)是用放射性核素标记的过量抗体与待检测抗原直接结合，采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争性放射免疫分析。二者的异同点如

下： ①标记物 RIA 以放射性核素标记抗原;IRMA 则是标记抗体。 ②反应速率 IRMA 反应速度比RIA 快。 ③反应原理 RIA 为竞争抑制性结合，反应参数与待检抗原量成反相关;IRMA为非竞争结合，反应参数与待检抗原成正相关。 ④特异性 IRMA 特异性较RIA高。

⑤灵敏度和检测范围 IRMA测定的灵敏度明显高于RIA， IRMA标准曲线工作范围较RIA宽1~2个数量级。 ⑥其他 RIA 所用抗体为多克隆抗体，对亲和力和特异性要求较高，但用量很少;IRMA 为试剂过量的反应，对抗体亲和力的要求不及 RIA，但用量大。此外，RIA 可以测量半抗原，但IRMA只能测定至少有两个以上表位的抗原。

2.何谓标记免疫技术?试述其应用前景。

答：标记免疫技术是利用多种标记技术与免疫学技术相结合而建立的分析体系。免疫技术是

以抗原-抗体免疫反应原理为基础对样品中相应抗体或抗原进行检测的方法。其主要特点是

高度特异性。 标记免疫技术是将多种可微量或超微量测定的示踪物(如荧光素、 放射性核素、酶、化学或生物发光剂等)对抗原或抗体进行标记，制成标记物，加入抗原抗体反应体系中与相应抗体或抗原反应，使免疫反应结果可被灵敏的分析测定。 标记免疫技术总体分为两类： 定位检测组织或细胞中抗体或抗原含量的免疫组化技术和检测

液体标本中抗体或抗原含量的免疫测定。按示踪物可分为：放射免疫技术、荧光免疫技术、

酶免疫技术、 化学发光免疫技术、 金免疫技术等。 按反应体系可分为均相和非均相免疫测定。

按使否使用放射性核素可分为放射性和非放射性免疫测定。

标记免疫技术应用广泛，可对组织和细胞中抗原物质进行定位检测; 能对各种体液中的激素、蛋白质、药物等进行微量甚至超微量测定;单克隆抗体技术、生物素-亲和素放大系统等技术使标记免疫技术的灵敏度、特异性、可测范围得到显著提高;随着新理论、新材料、新工艺以及新方法的不断研究发展， 标记免疫技术已经形成包含多种标记技术和多种反应模式的综合性检测体系，具有广阔的应用前景。