第二节　单克隆抗体的制备

　　一、单克隆抗体的产生

　　（一）动物体内诱生法 目前McAb治疗用或体外诊断用 的多采用该法。小鼠腹腔接种液体石蜡，一周后接种 杂交瘤细胞悬液，接种10～14天后，无菌抽取腹水，离心取上清液即可。

　　（二）体外培养法 这是实验室制备的方法。 将杂交瘤细胞置培养瓶中培养，离心后收集上清液。

　　二、单克隆抗体的纯化

　　从培养液或腹腔积液获得的单克隆抗体，不需要纯化 即可应用于日常诊断或定性研究 。

　　如果用于免疫标记测定 ，须分离和纯化 。可用半饱和、饱和硫酸铵进行沉淀，进行初步浓缩和纯化。可用亲和层析法进一步纯化。

　　三、单克隆化抗体的性质鉴定

　　(一)Ig类型测定

　　(二)特异性测定

　　(三)抗体效价测定 如ELISA效价低于10万 ，用于诊断测定将不会达到很高的敏感性，应重新制备。

　　(四)表位测定

　　(五)亲和力测定

　　(六)染色体分析

　　四、单克隆化抗体的特性

　　(一)单克隆抗体的特性

　　1.高度特异性

　　2.高度的均一性和可重复性

　　3.弱凝集反应和不呈现沉淀反应

　　4.对环境敏感性　单克隆抗体越纯 ，对温度越敏感，对pH越敏感。低浓度的NaCl 对单克隆抗体有一定的保护作用。

　　(二)单克隆抗体的优点与局限性

　　1.单克隆抗体的优点

　　(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体 。

　　(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的 、均一的抗体。

　　(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法 ，如IRMA和ELISA等。

　　(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗 。

　　2.单克隆抗体的局限性

　　(1)单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应 。

　　(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体 。

　　(3)制备技术复杂 ，而且费时费工 ，所以单克隆抗体的价格也昂贵 。

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