第三节HLA分型

　　一、血清学分型法

　　血清学分型法，是应用一系列已知抗HLA的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。因分型血清和淋巴细胞用量少，称为补体依赖的微量细胞毒(CDC)试验。能够应用该法检测的抗原称为SD抗原，包括HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DR、HLA-DQ。

　　血清学分型法操作简便易行、节约试剂、结果可靠、重复性好、无须特殊设备。其缺点是需花费大量时间去筛选抗血清，且不同批号抗血清结果常有不同。

　　所有应用HLA抗血清或抗体来确定HLA抗原性的方法均应属血清学分型法，而微量细胞毒试验只是应用最为广泛的传统方法。

　　二、细胞学分型法

　　(一)单向MLC

　　根据选用的刺激细胞类型，可将单向MLC分为阳性和阴性分型法。

　　1.阴性分型法 又称纯合子细胞分型法。

　　2.阳性分型法 阳性分型法又称预致敏淋巴细胞分型法(PLT)。

　　HLA-D抗原可用阴性和阳性分型法检测，HLA-DP抗原只用阳性分型法检测。

　　(二)双向MLC

　　遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于两者HLA不同，能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖，故称双向MLC。

　　本法不能判断型别，只能说明供、受体HLA抗原配合程度，双向MLC强度与两个体间HLA抗原差异成正比，器官或细胞移植时，应选择MLC最弱者为供体。

　　三、分子生物学分型法

　　(一)RFLP与PCR-RFLP分型法

　　限制性片段长度多态性(RFLP)分析，是最早建立的研究HLA多态性的DNA分型技术。这种HLA分型法称为DNA-RFLP。若对DNA片段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度大大增加，此类引入DNA体外扩增技术的限制性片段长度多态性分析则称为PCR-RFLP分型法。

　　PCR-RFLP分型法所应用的PCR引物为HLA组特异性的，此法特别适应于小量标本的研究和异基因骨髓移植供者的选择。

　　(二)PCR-SSO分型法

　　序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应(PCR-SSO)是PCR与杂交相结合的技术，从而对扩增产物作出HLA型别判断。

　　PCR-SSO是Ⅱ类HLA分型应用最广泛的方法，能够鉴定所有已知序列的HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP等位基因。

　　基因芯片是近年发展起来的一项新技术，将其与PCR-SSO结合应用于HLA分型，可使分型趋于规模化和自动化，尤其在HLA多态性和疾病遗传背景分析等方面更具优势。

　　(三)PCR/SSP分型法

　　该方法应用设计的一套HLA等位基因的序列特异性引物(SSP)，对待测DNA进行PCR扩增，从而获得HLA型别特异性的扩增产物。

　　(四)PCR-SSCP分型法

　　单链构象特异性-聚合酶链反应(PCR-SSCP)，是以待测基因PCR扩增为基础，对扩增的DNA单链(ssDNA)的HLA分型方法。

　　(五)SBT分型法

　　基于序列的HLA分型法(SBT)，可通过对扩增后的HLA基因片段进行的核酸序列测定判断HLA型别。