第四节免疫缺陷病检验

　　一、B细胞缺陷的检测

　　B细胞缺陷的检测主要包括B细胞数量和功能检测，以及B细胞产物Ig检测等。

　　IgG、IgM和IgA主要采用免疫浊度法，基层单位也可采用单向免疫扩散法。

　　IgD和IgE由于含量甚微,可采用RIA和ELISA等技术测定。

　　IgG亚类可用ELISA和免疫电泳法测定。

　　(一)血清Ig的测定

　　(二)同种血型凝集素的测定

　　同种血型凝集素，即ABO血型抗体，是出生后对红细胞A物质或B物质的抗体应答，因此检测同种血型凝集素滴度是判定体液免疫应答能力的简单而有效的方法。

　　(三)特异性抗体产生能力测定

　　正常人接种疫苗或菌苗后5～7天可产生特异性抗体(IgM)，若再次免疫会使抗体滴度更高(IgG)。因此，在接种疫苗后检测抗体产生情况也是判断体液免疫缺陷的一种有效方法。常用的抗原为伤寒菌苗和白喉类毒素，可在注射后2～4周测定抗体的滴度，了解抗体的反应性。

　　(四)噬菌体试验

　　人体清除噬菌体的能力被认为是目前观察抗体应答能力的最敏感的指标之一。正常人甚至新生儿，均可在注入噬菌体后5天内将其全部清除; 而抗体形成缺陷者，清除噬菌体的时间明显延长。

　　SmIg是B细胞最具特征性的表面标志。检测SmIg不但可以测算B细胞的数量，还可根据SmIg的类别判断B细胞的成熟情况。所有体液免疫缺陷者都有不同程度的B细胞数量或成熟比例方面的异常。

　　(五)B细胞表面膜免疫球蛋白(SmIg)的检测

　　(六)CD抗原检测

　　B细胞表面存在着CD10、CD19、CD20、CD22等抗原。CD10只出现在前B细胞，CD19、CD20从原始至成熟的B细胞都存在，而CD22只在成熟B细胞表达。故检测这些B细胞标志可了解B细胞数量、亚型和分化情况。

　　二、T细胞缺陷的检测

　　T细胞缺陷的检验主要包括T细胞功能和数量的检测。

　　(一)T细胞功能检测

　　主要包括T细胞体内和体外功能试验。

　　主要检测T细胞的迟发型超敏反应能力。

　　常用的皮试抗原是易于在自然环境中接触而致敏的物质，包括结核菌素、白色念珠菌素、毛发菌素、链激酶-链道酶(SK-SD)和腮腺炎病毒等。

　　凡3种以上抗原皮试阳性者为正常，少于2种阳性或在48小时反应直径小于10mm，则提示免疫缺陷或反应性降低。

　　1.皮肤试验

　　通常用PHA刺激淋巴细胞的增殖、转化试验来判断T细胞的功能。

　　T细胞缺陷患者存在着与免疫受损程度一致的增殖应答低下，甚至消失现象。

　　2.T细胞功能体外试验

　　(二)T细胞数量及其亚群检测

　　通常应用CD系统单克隆抗体,使用荧光抗体技术或流式细胞仪对T细胞总数和亚群进行检测。最常检测的CD标志为CD3、CD4、CD8、CD25等。

　　三、吞噬细胞缺陷的检测

　　(一)白细胞计数

　　当儿童外周血中性粒细胞<1.5×109/L，婴儿<1.0×109/L时，若能排除外在因素的影响，就应考虑遗传因素的作用。

　　(二)趋化功能检测

　　如Boyden小室法，可用于判断白细胞的趋化功能，对于家族性白细胞趋化缺陷症和吞噬细胞功能缺陷等疾病有诊断价值。

　　(三)吞噬和杀伤试验

　　是一种经典的免疫学试验。

　　(四)NBT还原试验

　　是一种简便、敏感的检测吞噬细胞还原杀伤能力的定性试验。可用于检测儿童慢性肉芽肿病和严重的6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏症。正常参考值为5%～10%。

　　用单克隆抗体检测细胞表面的黏附分子(如CD18、CD116、CD11c、CD621等)， 可更精确地研究吞噬细胞功能。

　　(五)黏附分子检测

　　四、补体系统缺陷的检测

　　补体系统的检测包括总补体活性和单个组分的测定。CH50、C1q、C4、C3和B因子等几项检测可大致反映补体缺陷的情况，对遗传性血管神经性水肿患者必须检测C1抑制剂才能最终确诊。

　　五、获得性免疫缺陷病的检测

　　HIV感染的免疫学诊断方法主要包括检测病毒抗原、抗病毒抗体、免疫细胞数目和功能等。

　　(一)HIV抗原检测

　　常用ELISA法检测HIV的核心抗原 p24。该抗原出现于急性感染期和AIDS晚期，其定量检测可作为早期或晚期病毒量的间接指标。在潜伏期，该抗原检测常为阴性。

　　初筛试验常用ELISA法、胶乳凝集法和免疫金层析法。确认试验主要用免疫印迹法。

　　判断标准为：①HIV抗体阳性：至少有两条膜带(gp41/gp120/gp160)或至少一条膜带与p24带同时出现;②HIV抗体阴性：无HIV抗体特异性条带出现;③HIV抗体可疑：出现HIV特异性条带，但带型不足以确认阳性者。

　　(二) HIV抗体检测

　　CD4+T细胞计数是反映HIV感染患者免疫系统损害状态的最明确指标。

　　当CD4+T细胞低于500/μl，则易机会性感染;低于200/μl，则发生AIDS。

　　(三)CD4+T细胞计数