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2019<临床检验初级检验技师考试>第二十四章第四节自身抗体检测

来源 :中华考试网 2018-09-29

  第四节常见自身免疫性疾病的自身抗体检测

  一、自身抗体的特性

  某些自身抗体因对疾病的判断具有高度特异性,已成为诊断相应疾病的血清指标或特异性抗体,有些自身抗体与疾病的活动性有相关性。

  二、抗核抗体的检测与应用

  抗核抗体(ANA)是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称。

  ANA的性质主要是IgG,也有IgM、IgA和IgD。

  其无器官和种属特异性。

  ANA主要存在于血清中,也可存在于胸腔积液、关节滑膜液和尿液中。

  按细胞内分子理化特性与抗原分布部位将ANA分为四大类:

  抗DNA抗体

  抗组蛋白抗体

  抗非组蛋白抗体

  抗核仁抗体

  在临床检测中ANA的命名通常按以下三种方式进行:

  1.根据抗原的化学名称命名 如抗dsDNA、抗RNP、抗DNP抗体、抗核小体抗体等。

  2.以第一位检出该抗体的患者命名 如抗Sm、抗Ro、抗La抗体。

  3.以相关疾病命名 如抗SSA、抗SSB抗体。

  (一)检测方法

  目前最常用间接免疫荧光法(indirect- immunofluorescence,IIF)作为总的ANA筛选试验。

  (二)常见的ANA荧光图形及临床意义

  1.均质型

  细胞核均匀着染荧光,有些核仁部位不着色,分裂期细胞染色体可被染色出现荧光。

  与均质型相关的自身抗体主要有抗不溶性DNP抗体,抗组蛋白抗体、抗dsDNA抗体也可产生均质型。

  高效价均质型主要见于SLE患者。

  低效价均质型可见于RA、慢性肝脏疾病、传染性单核细胞增多症或药物诱发的狼疮患者。

  2.斑点型

  细胞核内出现颗粒状荧光,分裂期细胞染色体无荧光显色。

  与斑点型相关的自身抗体涉及抗核糖体核蛋白颗粒抗体,如抗Sm、抗Ru1 RNP、抗SSB/La等抗体。

  高效价的斑点型常见于MCTD,同时也见于SLE、硬皮病、SS等自身免疫性疾病。

  3.核膜型

  荧光着色主要显示在细胞核的周边形成荧光环,或在均一的荧光背景上核周边荧光增强:分裂期细胞染色体区出现荧光着色。

  相关抗体主要是抗dsDNA抗体。

  高效价的周边型几乎仅见于SLE,特别是活动期SLE。

  4.核仁型

  荧光着色主要在核仁区,分裂期细胞染色体无荧 光着色。

  相关抗体是抗核仁特异的低分子量RNA抗体,抗RNA聚合酶-1抗体、抗U3 RNP抗体、抗PM-Scl抗体。

  核仁型在硬皮病中出现率最高,尤其是高效价核仁型对诊断硬皮病具有一定特异性,但核仁型也见于雷诺现象者,偶尔也出现于SLE。

  (三)抗双链DNA抗体的检测方法

  抗dsDNA抗体与细胞核的反应位点是位于DNA(外围区)脱氧核糖磷酸框架上。

  检测抗dsDNA 抗体最特异和最敏感的方法是用马疫锥虫或绿蝇短膜虫作为抗原基质进行间接免疫荧光检测,这是目前国内外临床常规检测抗 dsDNA抗体最常用的方法。具有高度特异性。

  抗dsDNA抗体在SLE的发病机制中起重要作用,SLE并发的狼疮性肾炎是由该抗体介导的免疫复合物病,抗dsDNA抗体可形成多种冷沉淀而致血管炎,SLE肾炎及典型的蝶形红斑均与该抗体有关。

  (四)抗核小体抗体的检测及应用

  核小体是真核生物细胞核染色质的基本单位。凋亡细胞是核小体的重要来源,当SLE患者的吞噬细胞对凋亡细胞的清除能力受损或降低,导致核小体在患者体内大量存积,多聚核小体与活化的单核细胞结合后被抗原递呈细胞呈递给CD4+Th2细胞,Th2细胞增殖活化,激活B细胞产生抗核小体抗体(AnuA)。

  AnuA的检测通常采用ELISA检测法。

  三、抗ENA抗体谱的检测与应用

  ENA(extractable nuclear antigens)是可提取核抗原的总称,ENA抗原可用盐水或磷酸盐缓冲液从细胞核中被提取。

  ENA属非组蛋白的核蛋白,为酸性蛋白抗原,是由许多小分子RNA与各自对应的特定蛋白质组成的核糖核蛋白颗粒,该组成使其各自的抗原性得以增强,分子中不含DNA。

  ENA抗原中主要包括Sm、RNP、SSA、SSB、Jo-1、Scl-70抗原。

  (一)抗ENA抗体的检测

  目前临床检测最常用的方法有免疫印迹技术(IBT)和斑点酶免疫技术(dot-ELISA)。

  (二)抗ENA抗体的临床意义

  1.抗Sm抗体

  抗Sm抗体仅发现于SLE患者中,是SLE的血清标志抗体,已列入SLE的诊断标准。

  2.抗核RNP抗体

  抗核RNP抗体是诊断MCTD的重要血清学依据,列入MCTD的诊断标准。

  3.抗SSA/Ro抗体和抗SSB/La抗体

  抗SSA/Ro抗体和抗SSB/La抗体是SS患者最常见的自身抗体。

  4.抗Jo-1抗体

  该抗体最常见于多发性肌炎(PM),故又称为PM-1抗体。

  5.抗Scl-70抗体

  该抗体是PSS的特征抗体。

  四、与小血管炎相关的自身抗体检测与应用

  (一)抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)

  主要的ANCA有两型:胞浆型(cANCA)和核周型(pANCA)。

  1.ANCA的检测方法

  总ANCA检测通常采用IFF,特异性ANCA检测最常用的是ELISA法。

  2.ANCA的临床应用

  ANCA被认为是原发性小血管炎的特异性血清标志物,最常见的疾病如韦格纳肉芽肿(WG)、原发性局灶节段坏死性肾小球肾炎(IFSNGN)、新月型肾小球肾炎(NCGN)、结节性多动脉炎(PAN)等均可检出ANCA。

  (二)抗磷脂抗体(APLA)

  抗磷脂抗体是针对一组含有磷脂结构抗原物质的自身抗体。这些抗体主要包括抗心磷脂抗体(ACLA)、抗磷脂酸抗体(APAA)和抗磷脂酰丝氨酸抗体。

  1.抗心磷脂抗体的检测 最常用ELISA法进行检测。

  2.抗心磷脂抗体的临床应用

  ACL抗体阳性或持续升高与患者的动静脉血栓形成、血小板减少、反复自发性流产及神经系统损伤为特征的多系统受累的抗磷脂综合征(APS)密切相关。

  五、与RA相关自身抗体的检测与应用

  (一)类风湿因子(RF)

  1.检测方法

  (1)胶乳颗粒凝集实验 只能检出血清中的IgM型RF。

  (2)速率散射比浊法 只能检出血清中的IgM型RF。

  (3)ELISA法 可以测定不同Ig类型的RF。

  2.临床应用

  RF在RA患者中的阳性检出率很高,是RA患者血清中常见的自身抗体。高效价RF阳性支持对早期RA的诊断,在RA患者,RF的效价与患者的临床表现呈正相关,即随症状加重而效价升高。

  但RF不是仅在RA患者中出现,在SLE、进行性全身性硬化症等自身免疫性疾病患者和部分老年人中也可阳性。因而RF对RA患者并不具有严格特异性,RF阳性不能作为诊断RA的唯一标准。尽管在多种疾病中可有RF阳性,但效价均较低(<40IU/ml),随着RF效价增加,RF对RA的诊断特异性增高。

  (二)抗角蛋白抗体(AKA)

  1.AKA的检测 常采用间接免疫荧光分析法。

  2.AKA的临床应用

  AKA主要见于类风湿关节炎患者。

  (三)抗环瓜氨酸肽抗体(anti-CCP)

  1.抗CCP抗体的检测 目前最常用的方法为ELISA法。

  2.抗CCP抗体的临床应用

  在RA早期阶段就可以出现阳性,具有很高的阳性预测值。

  六、与自身免疫性肝病相关自身抗体的检测与应用

  (一)抗平滑肌抗体(ASMA)

  1.ASMA的检测 主要采用间接免疫荧光分析。

  2.ASMA的临床应用

  ASMA是自身免疫性肝炎的血清学标志抗体。

  (二)抗线粒体抗体(AMA)

  1.AMA的检测

  间接免疫荧光法检测抗线粒体抗体。

  2.AMA的临床应用

  原发性胆汁性肝硬化患者几乎都有AMA,AMA抗原组中M2型对诊断原发性胆汁性肝硬化最具有诊断意义。

  七、与桥本甲状腺炎相关自身抗体的检测与应用

  桥本甲状腺炎患者常可出现抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA)及抗甲状腺微粒体抗体(TMA) 阳性。但这些抗体不是造成桥本甲状腺炎的直接原因。

  八、与神经系统自身免疫性相关自身抗体的检测与应用

  (一)抗乙酰胆碱受体(AChR)

  1.抗AChR抗体的检测 常用ELISA法进行检测。

  2.抗StrAb的检测 主要采用间接免疫荧光法。

  3.抗AChR抗体与抗StrAb的临床应用 约90%的MG患者抗AChR抗体阳性。

  (二)抗骨骼肌抗体(StrAb)

  StrAb常见于年龄大于60 岁的重症肌无力患者(55%)及成年后发病的重症肌无力患者(30%),较少见于小于20岁的重症肌无力患者。约90%的MG患者有胸腺异常,15%有胸腺瘤。同时患有MG与胸腺瘤的患者,其抗StrAb阳性率可达80%~90%。抗StrAb检测对成年以上重症肌无力患者是否并发胸腺瘤有很好的鉴别诊断价值。

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