第三节自动化荧光免疫分析系统

荧光免疫自动化分析仪包括样本盘、试剂盘(盒)、条码识别系统、仪器控制系统、信号检测系统、数据处理系统，能自动进行加样、温育、洗涤、分离、荧光强度测定和报告打印等功能。

根据抗原抗体反应后是否需要进行固相分离，分为均相和非均相两类。

均相荧光免疫测定主要有荧光偏振免疫测定法。

非均相荧光免疫测定主要有时间分辨荧光免疫测定法。

一、时间分辨荧光免疫分析仪

时间分辨荧光免疫测定(TRFIA)是以镧系元素标记抗原或抗体作为示踪物，并与时间分辨测定技术相结合，建立起来的一种新型非放射性微量分析技术，具有灵敏度高，镧系元素发光稳定，荧光寿命长，不受样品自然荧光干扰，标准曲线范围宽等特点，已在临床实验室广泛应用。

(一)原理

镧系元素中Eu3+最为常用。

它的激发光谱带较宽(波长为300～350nm)，发射光谱带窄(多在613nm±10nm)，在此波段内，来自生物样品的荧光干扰少。激发光谱和发射光谱之间的Stokes位移大，约为270nm，能有效地把激发光和发射的荧光分开。

(二)仪器测定技术要点

以双抗体夹心法为例：

1.抗原抗体结合 在包被了抗体的96孔反应板的小孔中加入待测标本，经温育后形成固相包被抗体和抗原复合物，然后进行洗涤，除去未结合的待测抗原。

2.加入Eu3+螯合抗体 经温育后形成固相包被抗体-待测抗原- Eu3+螯合抗体复合物，再次洗涤，除去未结合的部分。

3.加入酸性增强液 使Eu3+从免疫复合物中解离出来。游离的Eu3+在340nm的激发光照射下，发射出613nm的荧光，由时间分辨荧光读数仪记录。

4.信号检测。

(三)解离增强原理

被镧系元素标记的抗体或抗原形成的如铕标记抗原-抗体复合物在弱碱性反应液中经激发后的荧光信号较弱，必须再加入一种增强液，使Eu3+-抗体-抗原复合物的pH降低至2～3，以利于Eu3+从复合物上完全解离下来。

(四)注意事项

1.TRFIA分析用的酸性增强液易受环境、试剂、容器等里面的镧系元素污染，使本底升高，所用试剂和器材应尽量防尘。

2.TRFIA分析用载体最常用的是聚苯乙烯微96孔板，其荧光本底低，并有洗涤微孔板的自动装置，但不同厂家生产的微孔板，所产生的荧光有很大差异，应选择应用。

二、荧光偏振免疫分析仪

荧光偏振免疫测定(FPIA)为一种均相荧光免疫测定方法，其利用荧光物质在溶液中被单一平面的偏振光(波长485nm)照射后，可吸收光能而产生另一单一平面的偏振发射荧光(波长525nm)，该荧光强度与荧光标志物质在溶液中旋转的速度与分子大小成反比，常采用抗原抗体竞争反应原理，适用于小分子半抗原(如药物浓度)的检测。