第三节流式细胞仪免疫分析的技术要求

一、免疫检测样品制备

1.外周血淋巴细胞样品的制备

2.培养细胞的样品制备

3.新鲜实体组织单细胞悬液的制备

最常用的方法有机械法、酶处理法、化学试剂处理法和表面活性剂处理法等方法。

4.单细胞悬液的保存

最常用的处理方法有三种：深低温保存法，乙醇或甲醇保存法，甲醛或多聚甲醛保存法。

二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色

(一)免疫荧光标记最常用的荧光染料

1.FITC 亮绿色荧光

2.德州红 红色荧光

3.藻胆蛋白类 橙色至红色荧光

4.能量传递复合染料

(二)免疫荧光标记

在进行流式细胞分析前，首先应将已调好细胞比例的细胞悬液进行免疫荧光标记染色才能上机检测。通常应用的标记染色为直接免疫荧光染色和间接免疫荧光染色两种方法。

(三)细胞自发荧光

三、免疫胶乳颗粒技术的应用

液相芯片技术实现了样本分析时的低样本量 、多参数检测，具有更高的检测效率。

流式微球阵列(CBA)技术，应用标记不同含量荧光染料的微球代表不同待测物质，属于液相芯片技术。

四、流式细胞免疫学技术的质量控制

(一)单细胞悬液制备的质量控制

(二)细胞悬液免疫荧光染色的质量控制

(三)仪器操作技术的质量控制

(四)免疫检测的质量控制