第一节淋巴细胞的功能检测

淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。

体外试验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定。

体内试验主要是进行迟发型超敏反应，借此间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应。

一、T细胞功能检测

(一)T细胞增殖试验

1.原理

T细胞在体外受到有丝分裂原或抗原的刺激后，细胞的代谢和形态发生变化，主要表现为胞内蛋白质和核酸合成增加，发生一系列增殖反应，如细胞变大、胞质增多、胞质出现空泡、核染色质疏松、核仁明显，并转化为淋巴母细胞。

2、刺激物

体外刺激T细胞增殖反应的刺激物包括植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA)和美洲商陆(PWM)、白喉类毒素、破伤风类毒素、纯化蛋白衍生物(PPD)和白色念珠菌。

3.方法学　检测T细胞增殖反应的方法有：

(1)形态学检查法：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。缺点是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。

(2)3H-TdR掺入法：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好，但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。

(3)MTT比色法：本方法的敏感性虽不及3H-TdR掺入法，但操作简便，无放射性污染。

(二)T细胞分泌功能测定

体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后，分泌各种细胞因子，可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子的含量、生物学活性和基因表达水平，以反映T细胞功能。

(三)T细胞介导的细胞毒试验

T细胞介导的细胞毒试验是细胞毒性T细胞的特性，凡致敏T细胞再次遇相应靶细胞抗原，可表现出破坏和溶解靶细胞，它是评价机体细胞免疫水平的一种常用指标。

该试验原则是选用适当的靶细胞(常用可传代的已建株的人肿瘤细胞，如人肝癌、食管癌、胃癌等细胞株)，经培养后制成一定浓度的细胞悬液，按一定比例与待检的淋巴细胞混合，共温育一定时间 ，观察肿瘤细胞杀伤的情况。

该试验是评价机体细胞免疫水平的一种常用指标，特别是测定肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力，常作为判断预后和观察疗效的指标之一。

(四)体内试验

正常机体对某种特殊抗原建立了细胞免疫后，如用相同的抗原做皮肤试验，常可出现阳性的迟发型超敏反应。

本试验不仅可以检查受试者是否对某种抗原具有特异性细胞免疫应答能力，而且可以检查受试者总体细胞免疫状态：目前临床上常用于诊断某些病原微生物感染(结核、麻风等)和细胞免疫缺陷等疾病，也常用于观察细胞免疫功能在治疗过程中的变化及判断预后等。

1.特异性抗原皮肤试验 常用的特异性抗原皮肤试验为结核菌素皮肤试验。

2.PHA皮肤试验 将定量PHA注射到受试者前臂皮内，可非特异性刺激T细胞发生母细胞转化，呈现以单个核细胞浸润为主的炎性反应。PHA皮肤试验敏感性高，比较安全可靠，临床常用于检测机体的细胞免疫水平。

二、B细胞功能检测

(一)B细胞增殖试验

小鼠B细胞可用细菌脂多糖(LPS)作为刺激物，人则用含SPA的金黄色葡萄球菌菌体及抗IgM抗体等刺激。

(二)溶血空斑试验

1、经典溶血空斑形成试验

用于检测实验动物抗体形成细胞的功能。

2、被动溶血空斑试验

指抗体形成细胞产生的Ig与SRBC上的抗原结合，在补体参与下出现溶血反应。

3.临床应用与评价

溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响，评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。

(三)酶联免疫斑点试验

1.特点

既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量的方法。

2.原理

用抗原包被固相载体，加入待检的抗体产生细胞，即可诱导抗体的分泌。分泌的抗体与包被抗原结合，在抗体分泌细胞周围形成抗原抗体复合物，使细胞吸附于载体上，加入酶标记的第二抗体与细胞上的抗体结合，通过底物显色反应的深浅，可测定出生成的抗体量，并可在镜下计数着色的斑点形成细胞。

3.应用与方法学评价

方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量，其优点是稳定、特异、抗原用量少;可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量;可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。

常用于体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。

(四)体内试验

将适量抗原皮下或肌内注射免疫 ，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。

三、NK细胞活性测定

NK细胞具有细胞介导的细胞毒作用，能直接杀伤肿瘤细胞，因此可用传代培养的肿瘤细胞作为靶细胞，将单个核细胞与肿瘤细胞共同培养，肿瘤细胞的存活情况可以反映NK细胞的活性，肿瘤细胞存活率低，NK细胞的活性则高。

测定人NK细胞活性的靶细胞多用K562细胞株，而测定小鼠NK细胞活性则常采用YAC-1细胞株。

体外检测NK细胞活性的方法有形态学法、酶释放法、放射性核素释放法、化学发光法、流式细胞术法等。