第五节免疫标记电镜技术

一、免疫标记电镜技术的原理

免疫电子显微镜(IEM)技术是利用高电子密度的颗粒性标志物(如胶体金、铁蛋白等)标记抗体，或用经免疫组织/细胞化学反应能产生高电子密度产物者如辣根过氧化物酶标记抗体，在电子显微镜下对抗原抗体反应中的高电子密度标记的抗原(抗体)进行亚细胞水平定位的技术。

IEM较之免疫组织化学在光镜下的定位更为精确，可定位至细胞膜、细胞器，在探索病因、发病机制、组织发生等方面有其独特的优点。

二、免疫标记电镜技术标本制备的要求

在免疫染色方面，又分为包埋前染色、包埋后染色和超薄切片免疫染色三种

免疫标记电镜技术标本制备的要求是既要保存良好的细胞超微结构，又要注意保持组织的抗原性，因此在组织固定与取材时选用固定剂不宜过强，在取材方面，免疫电镜技术较光镜免疫化学技术要求更迅速、精细。

三、常用的免疫标记电镜技术

(一)免疫胶体金染色法

免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体检测的一种新型的免疫标记技术胶体金在电镜的应用中，既可用于透射电镜(TEM)又可用于扫描电镜(SEM)，其最大的优点就是可以通过应用不同大小的颗粒或结合酶标进行双重或多重标记。

在电镜水平，胶体金技术还可与其他技术结合，更充分地展示了它广泛的应用范围。如胶体金技术与冷冻蚀刻技术结合，可对细胞膜不同膜蛋白颗粒或细胞膜表面的其他成分进行精细定位;与荧光技术结合，可将荧光素和胶体金同时结合于某种生物大分子，制成探针，同时进行荧光显微镜和电镜定位，使定位方便、准确，提高了工作效率;与分子杂交技术相结合，产生了电镜原位杂交技术，在超微结构水平上精确定位基因位点，为深入研究生物体功能提供了有利的工具。

(二)免疫胶体铁细胞化学染色法

胶体铁是一种阳离子胶体，将抗体分子标记上胶体铁，通过普鲁士蓝反应呈色，胶体铁颗粒有一定大小，具有一定的电子密度，可用在电镜和光镜水平上的抗原(抗体)定位研究。

(三)酶免疫电镜技术

酶免疫电镜技术是利用酶的高效率催化作用，对其底物的反应形成不同的电子密度，借助于电子显微镜观察，通过对酶的定位，对抗原(抗体)进行定位。