第四节亲和组织化学染色

亲和组织化学是利用两种物质之间的高度亲和力而建立的方法。

一、生物素-亲和素法

(一)亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术

按一定比例将亲和素与酶标生物素结合 ，形成可溶性亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)。当其与检测反应体系中的生物素化抗体(直接法)或生物素化第二抗体(间接法)相遇时，ABC中未饱和的亲和素结合部位即可与抗体上的生物素结合，使抗原抗体反应体系与ABC标记体系连成一体进行检测。

ABC法的优点：敏感性高。生物素与亲和素的结合十分牢固 ，并且1个分子亲和素有4个生物素结合位点，可以分别和生物素化的抗体和酶结合，1个过氧化物酶或免疫球蛋白分子又可结合多个生物素分子 ，从而形成网络状复合物。此外，ABC法尚具有亲和力强、特异性高、第一抗体和第二抗体工作浓度低、操作时间短、可以多重标记等特点。

(二)桥联亲和素-生物素技术(BRAB技术)

是以游离的亲和素作为桥联剂，利用亲和素的多价性，将检测反应体系中抗原、生物素化抗体复合物与标记生物素(如酶标生物素)联结起来，达到检测反应分子的目的。

(三)标记亲和素-生物素技术(LAB技术)

LAB法是以标记亲和素直接与免疫复合物中的生物素化抗体连接进行检测。该法具有相当高的灵敏度，由于省略了加标记生物素步骤，操作较BRAB法简便。间接LAB法采用的是生物素化的第二抗体 ，可以进一步提高检测灵敏度。

二、葡萄球菌A蛋白法

葡萄球菌A蛋白技术是根据SPA能与多种动物IgG的Fc段结合的原理，用SPA标志物(酶、荧光素、放射性物质等)显示抗原与抗体结合反应的免疫检测实验。SPA常用HRP标记，可应用于间接法。SPA法的染色程序基本同酶标抗体法，仅第二抗体改用SPA-HRP。

三、凝集素法

凝集素(1ectin)是一类从各种植物种子、无脊椎动物和较高等动物组织中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白质。它可使红细胞凝集，故称凝集素。因此凝集素可以作为一种探针来研究细胞上的糖基，特别是细胞膜的微小化合物结构，从而探索细胞的生物学结构和演变过程。

凝集素受体是存在于细胞膜上的糖蛋白和糖脂中的寡糖，其在胚胎不同发育阶段、细胞成熟过程及代谢改变、细胞恶性转化等过程中都有不同程度的改变。其在肿瘤研究中对肿瘤细胞的起源以及良恶性肿瘤的分化都可以进行标记，凝集素是研究肿瘤细胞膜糖分子变化的一种理想工具。

凝集素可采用直接法和间接法进行细胞化学染色。①直接法：将标志物直接结合在凝集素上，使其与组织细胞相应的糖蛋白或糖脂相结合;②间接法：先将凝集素与组织细胞膜糖基结合，然后再用标记的抗凝集素抗体(即用凝集素免疫动物制备抗凝集素抗体)与结合在细胞上的凝集素反应。

四、链霉亲和素-生物素法

链霉亲和素(SA)是从链霉菌培养物提取的一种纯蛋白，不含糖基，有4个生物素结合位点 ，并且具有高度的亲和力，其功能类似亲和素。利用生物素结合的第二抗体与酶标记的链霉亲和素蛋白就构成了酶标链霉亲和素-生物素方法(LSAB)。

1.敏感性高

2.低背景着色

3.第一抗体工作浓度低

4.操作简便