第二节免疫金标记技术

免疫金标记技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标志物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测。

一、胶体金的制备

(一)制备原理

胶体金的制备一般采用还原法，常用的还原剂有枸橼酸钠、鞣酸、维生素C、白磷、硼氢化钠等。

(二)技术要点

枸橼酸三钠还原法制备金溶胶，如此制备的金溶胶其可见光区最高吸收峰在535nm。金溶胶的光散射性与溶胶颗粒的大小密切相关，一旦颗粒大小发生变化，光散射也随之发生变异，产生肉眼可见的显著的颜色变化。

(三)注意事项

1.玻璃容器的清洁

玻璃表面少量的污染会干扰胶体金颗粒的生成，一切玻璃容器应绝对清洁，用前经过强酸洗，后硅化。

2.试剂、水质和环境

氯金酸极易吸潮，对金属有强烈的腐蚀性，不能使用金属药匙，避免接触天平称盘。其1%水溶液在4℃可稳定数月不变，实验用水一般用双蒸馏水，实验室中的尘粒要尽量减少，否则实验的结果将缺乏重复性。

二、免疫金的制备

(一)制备原理

免疫金是指胶体金与抗原或抗体等大分子物质的结合物，在免疫组织化学技术中，习惯上称之为金探针。制备原理为蛋白质被吸附到胶体金颗粒表面而结合的过程。

(二)技术要点

1.胶体金溶液的pH

2.蛋白质最适标记量

(三)注意事项

多种蛋白质、葡聚糖、PEG2000、明胶等均为良好的高分子稳定剂，PEG和BSA是最常用的稳定剂。