第四节生物素-亲和素系统的应用

一、 生物素-亲和素系统基本类型及原理

1.以游离亲和素为中间物，分别连接包含生物素化大分子的待检反应体系和标记生物素，称为BAB法;后来又在其基础上发展了亲和素-生物素化酶复合物技术(ABC)。

2.直接用标记亲和素连接生物素化大分子反应体系进行检测的BA法，或称标记亲和素-生物素法(LAB)。

依据待检反应体系中所用的是生物素化第一抗体或生物素化第二抗体，又分为直接法BAS和间接法BAS。

(一)BAB法

BAB法也称为桥联亲和素-标记生物素法(BRAB)，是以游离的亲和素(或链霉亲和素)作为桥联剂，利用亲和素的多价性，将检测反应体系中抗原-生物素化抗体复合物与标记生物素(如酶标生物素)连接起来，达到检测反应分子的目的。

(二)ABC法

原理是预先按一定比例将亲和素与酶标生物素结合，形成可溶性的亲和素生物素-过氧化物酶复合物(ABC)。

当其与检测反应体系中的生物素化抗体(直接法)或生物素化第二抗体(间接法)相遇时，ABC中未饱和的亲和素结合部位即可与抗体上的生物素结合，使抗原-抗体反应体系与ABC标记体系连成一体进行检测。

(三) BA法

BA(或LAB)法是以标记亲和素(或链霉亲和素)直接与免疫复合物中的生物素化抗体连接进行检测。

二、生物素-亲和素系统在酶免疫测定中的应用

(一)BAS在ELISA中的应用

把BAS与ELISA偶联起来，可大大提高ELISA测定的灵敏度：每个亲和素可结合4个生物素，可使反应明显放大;亲和素与生物素间极高的亲和力，使反应结合更牢固稳定，而且特异性高;用小分子生物素代替酶标记抗体，可减少反应中的空间位阻。

(二)生物素-亲和素系统在均相酶免疫测定中的应用

BAS除了作为免疫测定的放大系统外，还可作为均相酶免疫测定中高效的酶活性调变系统。

三、生物素-亲和素系统在荧光免疫技术中的应用

BAS用于荧光抗体技术，通常采用BA法，即用荧光素直接标记亲和素(或链霉亲和素);也可采用游离亲和素(或链霉亲和素)搭桥，两端分别连接生物素化抗体和荧光素标记的生物素(BAB法)或荧光标记的抗亲和素(或链霉亲和素)抗体的夹心法。

四、生物素-亲和素系统在放射免疫测定中的应用

BAS主要与免疫放射分析(IRMA)检测体系偶联，用于对终反应的放大(BA法)。

此外，BAS也可用于IRMA反应后B，F成分的分离。该法的优点是克服了其他IRMA

法需多次离心的麻烦，待测复合物与固相结合更牢固，操作更简便。

五、生物素-亲和素系统在分子生物学中的应用

BAS在分子生物学领域中的应用El渐增多，目前主要集中在以生物素标记核酸探针进行的定位检测，用BAS制备的亲和吸附剂进行基因的分离纯化以及将免疫测定技术与PCR结合建立免疫-PCR(immuno-PCR)用于抗原的检测等三方面。