第二节亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记

亲和素和链霉亲和素是生物亲和素的天然特异性结合物。而且，二者均为大分子蛋白，因此几乎所有用于标记的物质均可以同亲和素(AV)或链霉亲和素(SA)结合。亲和素或链霉亲和素的上述特性，是建立生物素-亲和素(链霉亲和素)放大技术的重要基础。

一、亲和素及其活性

耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用，尤其是与生物素结合后，稳定性更好。每个亲和素能结合4个分子的生物素，二者之间的亲和力极强。

二、链霉亲和素及其活性

链霉亲和素分子中每条肽链都能结合一个生物素，一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子。

三、亲和素（或链霉亲和素）的标记

用于标记亲和素或链霉亲和素的小分子示踪物有125Ⅰ、胶体金、荧光素和化学发光物，大分子物质如酶、抗原或抗体、铁蛋白和荧光蛋白等，其中最常用的是酶、异硫氰酸荧光素(FITC)和胶体金。可以通过与生物素化酶复合物中的生物素结合，间接地与酶形成结合物。

(一)亲和素的标记

1.HRP-亲和素结合物的制备

(1)改良过碘酸钠法

(2)戊二醛法

2.亲和素-生物素化HRP复合物的制备

3.亲和素-生物素化碱性磷酸酶(ABAP)复合物的制备

(二)链霉亲和素的标记

1.HRP-SA结合物的制备采用过碘酸钠法直接标记

2.SA-生物素化HRP复合物的制备

3.AP-SA结合物的制备采用戊二醛二步法