第三节化学发光免疫分析的类型

一、直接化学发光免疫分析

直接化学发光免疫分析是用化学发光剂(如吖啶酯)直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体一待测抗原一吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂(H2O2)和pH纠正液(NaOH)使呈碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光，由集光器和光电倍增管接收，记录单位时间内所产生的光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准曲线上计算出待测抗原的含量。

吖啶酯化学发光的特点：①推动者发光的氧化反应简单快速，不需要催化剂，只要在碱性环境中即可进行;②反应体系中加入H2O2和NaOH溶液后，发光迅速，背景噪声低，保证了测定的敏感性;③吖啶酯可直接标记抗原或抗体，结合稳定，不影响标志物的生物学活性和理化特性;④吖啶酯发光为瞬间发光，持续时间短，因此，对信号检测仪的灵敏度要求比较高。

二、化学发光酶免疫分析

化学发光酶免疫分析(CLEIA)是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗体(或抗原)，与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体一待测抗原一酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光。由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。

三、电化学发光免疫分析

电化学发光免疫分析(ECLIA)与一般化学发光分析不同，是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应，它包括电化学和化学发光两个过程。在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体(抗原)，用三联吡啶钌标记抗体(抗原)，在反应体系内待测标本与相应的抗体发生免疫反应，形成磁性微粒包被抗体一待测抗原一三联吡啶钌标记抗体复合物，这时将上述复合物吸人流动室，同时引入TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光。光信号由安装在流动室上方的光信号检测器检测，光的强度与待测抗原的浓度成正比。

四、临床应用

由于化学发光免疫测定技术无放射性污染，同时能达到放射免疫测定的灵敏度，而且还具有快速、准确、特异、可自动化等特点，因此已广泛应用于各种激素、肿瘤标志物、药物浓度及其他微量生物活性物质的测定。