第一节概述

一、荧光的基本知识

1、荧光

荧光就是某些物质受到一定波长光的激发后，在极短时间内发射出的波长大于激发光波长的光。

2、发射光谱

发射光谱是指固定激发光波长，在不同波长下所记录到的样品所发射的荧光强度。激发态电子回到的能级不同，发出的荧光波长就不同。

3、激发光谱

激发光谱是指固定检测发射光波长，用不同波长的激发光激发样品所记录到的相应的荧光发射强度。

4、荧光效率

荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率称为荧光效率。在一定范围内，荧光强度与激发光强度呈正相关，即激发光越强，荧光越强，但过强的激发光会使荧光很快褪去。

荧光效率=发射荧光的光量子数(荧光强度)/吸收光的光量子数(激发光强度)

5、荧光寿命

荧光物质被激发后产生的荧光衰减到一定程度时所用的时间称为荧光寿命。

激发光消失，荧光现象随之消失，但各种荧光物质的荧光寿命不同，可利用延时测定的方法消除某些短寿命荧光的干扰，此为时间分辨荧光免疫测定的理论基础。

6、荧光淬灭

荧光物质在某些理化因素(如紫外线照射、高温、苯胺、酚、I-、硝基苯等)作用下，发射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。

7、荧光偏振

P=FH-FL/FH+FL

式中：P表示偏振度，FH表示激发光起偏器和荧光检偏器的透射轴方向平行时测得的荧光强度，FL是上述两者方向互相垂直时测得的荧光强度。

当P=0时，说明完全不偏振;P在-1～+1之间即为部分偏振。

二、荧光物质

(一)荧光色素

能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物称为免疫荧光色素或荧光染料。

1、异硫氰酸荧光素(FITC)黄绿色荧光。

2、四乙基罗丹明(RB200)橘红色荧光。

3、四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)橙红色荧光。

4、藻红蛋白(R-RE)橙色荧光。

(二)其他荧光物质

1、镧系螯合物

其中以Eu3+应用最广。Eu3+螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于时间分辨荧光免疫测定。

2、酶作用后产生荧光的物质

某些化合物本身无荧光效应，一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。