第三节免疫放射分析

免疫放射分析(IRMA)是在RIA的基础上发展起来的放射性核素标记免疫分析。

与经典RIA不同，IRMA是以过量125I标记抗体与待测抗原进行非竞争性免疫结合反应，用固相免疫吸附剂对B或F进行分离，其灵敏度和可测范围均优于RIA，操作程序较RIA简单。

一、基本原理

1.单位点IRMA

是先利用过量标记抗体与待测抗原进行反应，形成抗原-抗体复合物，反应平衡后,再用固相抗原结合反应液中剩余的未结合标记抗体并将其分离，测定上清液的放射量。

2.双位点IRMA

是先用固相抗体与抗原反应结合，然后再用过量的标记抗体与已结合于固相的抗原的另一抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-标记抗体复合物，洗弃反应液中剩余的标记抗体，测定固相上的放射性。

二、IRMA与RIA的比较

1.标志物

RIA是以放射性核素标记抗原，抗原有不同种类,标记时需根据其理化和生物学特性，选用不同的放射性核素和方法。IRMA则是标记抗体，为大分子蛋白，性质较稳定，不同抗体标记方法基本相同，标记抗体的比活度高，提高了测定的灵敏度。

2.反应速率

反应速率与反应物浓度成正比，IRMA反应中，标记抗体为过量，且抗原抗体结合为非竞争性，故反应速率比RIA快。

3.反应原理

RIA为竞争抑制性结合，反应参数与待检抗原量成反比。IRMA为非竞争性结合，反应参数与待检抗原浓度呈正相关。

4.特异性

IRMA采用针对不同抗原决定簇的双抗体结合抗原，反应受交叉反应物的干扰，较仅用单一抗体的RIA者小，测定特异性较高。

5.灵敏度和检测范围

IRMA反应中，抗原与抗体属非竞争性，微量抗原能与抗体充分结合;RIA中标记抗原和待检抗原竞争,与有限量抗体的结合不充分，故IRMA测定的灵敏度明显高于RIA。由于抗体量大，能结合较多的抗原量，IRMA用于抗原含量较高标本测定时，结果也较RIA好,IRMA标准曲线工作范围较RIA宽1～2个数量级。

6.其他

RIA所用抗体为多克隆性，因此对其亲和力及特异性要求较高，但用量很少;IRMA为试剂过量的非竞争性结合反应对抗体亲和力的要求不及RIA，但用量大。RIA可以测定大分子和小分子抗原，但IRMA则只能测定至少有两个抗原决定簇的抗原。