第二节放射免疫分析

放射免疫分析(RlA)是以放射性核素作示踪剂的标记免疫分析方法，它具有高度灵敏性、特异性和精确性等特点，特别适用于激素、多肽等含量微少物质的超微量分析。

一、基本原理

经典RIA是采用标记抗原和非标记抗原竞争性结合有限量特异性抗体的反应。

二、实验方法及测定

RIA具体测定方法包括以下三个主要步骤：

(一)抗原抗体反应

根据RIA原理，将未标记抗原(标准品和待测样品)、标记抗原和特异性抗体加入反应试管中，在一定条件(温度、时间及介质pH)下进行竞争抑制反应。

(二)分离结合与游离标志物

RIA反应平衡后，标记抗原与试剂抗体形成免疫复合物(B)。由于其含量极少，不能自行沉淀，因此需加入适当的沉淀剂才能将其彻底沉淀，然后经离心使其与游离的标记抗原(F)分离。某些小分子抗原也可采用吸附法分离B与F。

目前RIA常用的分离方法有以下几种：

1.第二抗体沉淀法

2.聚乙二醇(PEG)沉淀法

3.PR试剂法

4.活性炭吸附法

(三)放射性测量及数据处理

分离B、F后，即可对标记抗原抗体复合物(B)进行放射性测量，也可根据RIA实验方法及目的，测定游离标记抗原(F)。绘制标准曲线(剂量-反应曲线)，样品管以其测量或计算的反应参数，通过标准曲线即可查出相应的待检抗原浓度，目前已普遍采用计算机进行数据处理、自动绘制标准曲线和打印样品抗原浓度。