第四节免疫电泳技术

免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物。

加快了沉淀反应的速度。

电场规定了抗原抗体的扩散方向，使其集中，提高了灵敏度。

可将某些蛋白组分根据其带电荷的不同而将其分开，再分别与抗体反应。

一、对流免疫电泳

对流免疫电泳实质上是将双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术。

在pH8.6的缓冲液中,大部分蛋白质抗原成分常带较强的负电荷，在电场中向正极移动。

而作为抗体的IgG，等电点偏高(约为pH6～7)，在pH8.6时带负电荷较少，再加上分子量较大,移动速度慢，所以它本身向正极移动缓慢甚至不移动，这样它就会在凝胶的电渗作用下，随水流向负极。

电渗引向负极移动的液流速度超过了IgG 向正极的移动速度，因此抗体移向负极，在抗原抗体最适比处形成沉淀线，从沉淀线相对于两孔的位置还可大致判断抗原抗体的比例关系。

实验时在琼脂板上打两排孔，标记上正极与负极，将抗原溶液放入负极侧的孔内，相应抗体放入正极侧的孔内，通电后，带负电荷的抗原向正极泳动，而抗体借电渗作用向负极泳动，在两者之间或抗体的另一侧(抗原过量时)形成沉淀线。

二、火箭免疫电泳

火箭免疫电泳是将单向免疫扩散与电泳相结合的一项定量检测技术，实质上是加速的单向扩散试验。

实验时，将抗体混合于琼脂中，样品孔中的抗原置于负极端，电泳时抗体不移动，抗原向正极泳动，随着抗原量的逐渐减少，抗原泳动的基底区越来越窄，抗原抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰。

当琼脂中抗体浓度固定时，峰的高度与抗原量呈正相关，因此用已知标准抗原作对照，抗原浓度为横坐标，峰的高度为纵坐标，绘制标准曲线，待测样品浓度就可根据沉淀峰的高度在标准曲线中计算获得。

三、免疫电泳

免疫电泳技术是区带电泳+免疫双向扩散。

检测原理是先用区带电泳技术将蛋白质抗原按其所带电荷、分子量和构型不同在凝胶中电泳，分成肉眼不可见的若干区带，电泳停止后，沿电泳方向挖一与之平行的抗体槽，加入相应抗血清，置室温37℃作双向扩散，经18～24小时后，已分离成区带的各种抗原成分与抗体槽中相应抗体在两者比例适合处形成弧形沉淀线。

免疫电泳为定性试验，目前主要应用于纯化抗原和抗体成分的分析及正常和异常免疫球蛋白的识别与鉴定方面，例如多发性骨髓瘤患者血清在免疫电泳后，可观察到异常的M蛋白沉淀弧。

四、免疫固定电泳

免疫固定电泳是电泳加沉淀反应技术，可用于各种蛋白质的鉴定。

该方法原理是先将待检样品在凝胶板上作区带电泳，将蛋白质分离成不同区带，然后在其上覆盖抗血清，当抗血清与某区带中的单克隆免疫球蛋白结合，便形成抗原抗体复合物而沉淀。

本法可用于鉴定迁移率近似的蛋白和M蛋白，免疫球蛋白轻链，尿液、脑脊液等微量蛋白，游离轻链，补体裂解产物等。

最大的优势是分辨率强，敏感度高，操作周期短，仅需数小时，结果易于分析，目前已作为常规检测。

五、交叉免疫电泳

交叉免疫电泳是将区带电泳和火箭免疫电泳相结合的免疫电泳分析技术。

交叉免疫电泳是一种有效的抗原蛋白定量技术，可一次同时对多种抗原定量。分辨率较高，有利于各种蛋白组分的比较，对于蛋白质遗传多态性、微小异质性、蛋白质裂解产物和不正常片段等进行定性分析。