第二节液体内沉淀试验

一、絮状沉淀试验

抗原抗体溶液在电解质的存在下结合，形成絮状沉淀物，这种絮状沉淀受抗原和抗体比例的直接影响，因此常用来作为测定抗原抗体反应最适比例的方法。

(一)抗原稀释法

(二)抗体稀释法

(三)方阵滴定法

抗原进行一系列稀释与恒定浓度抗血清反应。

抗体进行一系列稀释与恒定浓度抗原反应。

方阵滴定法即棋盘滴定法

二、免疫浊度测定

免疫浊度测定本质上属于液体内沉淀反应。

将现代光学测量仪器与自动化检测系统相结合应用于沉淀反应。

可进行液体中微量抗原、抗体及小分子半抗原定量检测。

(一)免疫比浊测定的影响因素

1、抗原抗体的比例

抗原抗体的比例是浊度形成的关键因素，当抗原和抗体的比例适当时，二者全部结合，既无过剩的抗原，也无过剩的抗体。

当反应液中抗体过量时，IC的形成随着抗原递增而增加，至抗原、抗体最适比例处达最高峰，这就是经典的海德堡曲线理论。

当抗原过量时，形成的IC(免疫复合物)分子小，而且会发生再解离，使浊度反而下降，光散射亦减少，这就是高剂量钩状效应。

2、抗体的质量

免疫比浊测定法要求抗体的特异性强、效价高、亲和力强，并使用R型抗体。

3、抗原抗体反应的溶液

抗原抗体反应液的最适pH为6.5～8.5。

一般常使用磷酸盐缓冲液作为免疫比浊法的反应液。

4、增浊剂

某些非离子型亲水剂对促进IC的形成有显著的增强作用，如聚乙二醇(PEG)、吐温-20。

其作用是消除蛋白质(抗原或抗体)分子周围的电子云和水化层，促进抗原、抗体分子靠近，结合形成大分子复合物。

(二)抗体稀释法

1、透射免疫比浊法

2、散射免疫比浊法

3、免疫胶乳比浊法