第三节间接凝集反应

间接凝集反应是将可溶性抗原(或抗体)先吸附于适当大小的颗粒性载体表面，然后与相应抗体(或抗原)作用，在适宜电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象。

一、间接凝集反应的类型

(一)正向间接凝集反应

红细胞包被抗原，用以检测抗体的血凝反应，称为正向间接血凝反应(PHA)。

(二)反向间接凝集反应

红细胞包被抗体，用以检测抗原的血凝反应，称为反向间接血凝反应(RPHA)。

(三)间接凝集抑制反应

先将可溶性抗原(或抗体)与相应的抗体(或抗原)混合，然后再加入抗原(或抗体)致敏的红细胞，则能抑制原先的血凝现象，称为正向(或反向)间接血凝抑制试验。

间接血凝抑制试验可用于检测抗体、自身抗体、变态反应性抗体，也可测定抗原。

(四)协同凝集反应

协同凝集反应与间接凝集反应的原理相类似，但所用载体既非天然的红细胞，也非人工合成的聚合物颗粒，而是一种金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)。SPA具有与IgG的Fc段结合的特性，因此当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的颗粒载体。如与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。

间接凝集反应适用于各种抗体和可溶性抗原的检测。以载体来分，常用的为红细胞、胶乳颗粒及明胶颗粒等。

二、间接血凝试验

间接血凝试验其原理是将抗原(或抗体)包被于红细胞表面，成为致敏载体，然后与相应的抗体(或抗原)结合，从而使红细胞被动的凝聚在一起，出现可见的凝集现象。

(一)载体

红细胞是大小均一的载体颗粒，最常用的为绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红细胞。

致敏的新鲜红细胞保存时间短，且易变脆、溶血和污染，只能使用2～3天。为此一般在致敏前先将红细胞醛化，可长期保存而不溶血。常用的醛类有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。红细胞经醛化后体积略有增大，两面突起呈圆盘状。

(二)致敏

致敏用的抗原或抗体要求纯度高，并保持良好的免疫活性。用蛋白质致敏红细胞的方法有直接法和间接法。

(三)血凝试验

血凝试验可在微量滴定板或试管中进行，将标本倍比稀释，一般为1:64，同时设不含标本的稀释液为对照孔。

凡红细胞沉积于孔底，集中呈一圆点的为不凝集(-)。如红细胞凝集，则分布于孔底周围。

根据红细胞凝集的程度判断阳性反应的强弱，以++凝集的孔为滴度终点。

三、胶乳凝集试验

胶乳凝集试验也是一种间接凝集试验，所用载体为聚苯乙烯胶乳，是一种直径约为0.8μm大小的圆形颗粒，带有负电荷，可物理性吸附蛋白分子，但这种结合牢固性差。胶乳凝集试验分试管法和玻片法两种。

四、明胶凝集试验

明胶凝集试验也是一种间接凝集试验，将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集。

该方法具有高灵敏度、简便、快速等优点，广泛应用于HIV-1抗体和抗精子抗体检测等。

五、间接凝集反应的应用

(一)抗原的检测

反向间接凝集试验用于检测病原体可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。

(二)抗体的检测

可用于检测细菌、病毒和寄生虫等感染后产生的抗体，例如间接凝集试验或明胶颗粒凝集试验用于检测抗人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体以诊断艾滋病、胶乳凝集试验用于检测抗溶血素O等。