第二节单克隆抗体的制备

一、单克隆抗体的两大产生方法

(一)动物体内诱生法

先在小鼠腹腔注射液体石蜡或弗氏不完全佐剂，一周后将杂交瘤细胞悬液注射腹腔，1～2周后，无菌抽取腹水，离心取上清液即可。

(二)体外培养法

将杂交瘤细胞置培养瓶中培养，待培养液颜色改变或细胞过多开始死亡时，收集上清液，离心去掉碎片及细胞即可。

二、单克隆抗体的纯化

从培养液或腹腔积液获得的单克隆抗体，不需要纯化即可应用于日常诊断或定性研究。

由于其中含有大量来自培养基、宿主或克隆细胞本身的一些无关蛋白，如果用于免疫标记测定，如放射性核素、酶、荧光素或生物素标记等，必须进一步分离和纯化。

三、单克隆抗体的性质鉴定

(一)Ig类型测定

(二)特异性测定

(三)抗体效价测定

(四)表位测定

(五)亲和力测定

(六)染色体分析

四、单克隆抗体的特性

(一)单克隆抗体的特性

1.高度特异性

2.高度的均一性和可重复性

3.弱凝集反应和不呈现沉淀反应

4.对环境敏感性

(二)单克隆抗体的优点

1.杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体

2.可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体

3.由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等

4.由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗

(三)单克隆抗体的局限性

1.由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。

2.单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。

3.制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。