自考《仪器分析、检验仪器原理及维护》专项习题：论述

　　论述题

　　1. 简述医学检验中常用的荧光显微镜的原理、结构及用途。

　　1. 答：荧光显微镜是以紫外线为光源来激发生物标本中的荧光物质，产生能观察到的各种颜色荧光的一种光学显微镜。

　　荧光显微镜是由光源、滤色系统和光学系统等主要部件组成。荧光显微镜与普通光学显微镜主要区别在于光源和滤光片不同。通常用高压汞灯作为光源，可发出紫外线和短波长的可见光;滤光片有二组，第一组称激发滤片，位于光源和标本之间，仅允许能激发标本产生荧光的光通过(如紫外线);第二组是阻断滤片，位于标本与目镜之间，可把剩余的紫外线吸收掉，只让激发出的荧光通过，这样既有利于增强反差，又可保护眼睛免受紫外线的损伤。光学系统主要有反光镜、聚光镜、目镜、物镜、照明系统等组成。

　　荧光显微镜可用于观察检测细胞中能与荧光染料特异结合的特殊蛋白、核酸等，其标本染色简便、荧光图像色彩鲜亮，而且敏感度较高。

　　2. 简述等电聚焦电泳法的原理、特点。

　　2. 答：原理：不同的蛋白质等电点不同，如果分子处于pH和等电点一致的溶液中，则泳动就停止进行。如果溶液内的pH是位置的函数，或者说有一个pH的位置梯度，那么在一个稳定连续的线性pH梯度的溶液(两性载体电解质)中进行分离，每一种被分离的两性物质都移向与它的等电点相一致的pH位置，在那里不再移动(称为聚焦)。由于在这点净电荷(正负抵消)为零，因而又称等电聚焦。

　　特点：①使用两性载体电解质，在电极之间形成稳定的、连续的、线性的pH梯度。②由于“聚焦效应”，即使很小的样品也能获得清晰的、鲜明的区带界面③电泳速度快。④分辨率高。⑤加入样品的位置可任意选择。⑥可用于测定蛋白质类物质的等电点。⑦适用于中、大分子量(如蛋白质、肽类、同工酶等)生物组分的分离分析。

　　3. 简述双向凝胶电泳(二维电泳)的工作原理。

　　答：第一维采用等电聚集(isoelectric focusing, IEF)电泳。当把蛋白质加人到含有pH梯度的载体时，如果蛋白质所在位置的pH值与其等电点不同，则该蛋白质会带一定量的正电荷或负电荷，在外加强电场的作用下，蛋白分子就会分别向正极或负极泳动，直到pH值与其等电点相等的位置，蛋白质不再泳动，而浓缩成狭窄的区带。

　　第二维采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。蛋白质的电泳迁移率取决于各种蛋白质所带的静电荷、分子量的大小以及形状的不同。SDS-PAGE就是按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。蛋白质样品经过双向凝胶电泳两次分离后，其结果不再是条带状，而是呈现为斑点状。

　　4. 简述微生物自动鉴定及药敏分析系统基本结构与相应功能。

　　答：(1)测试卡(板)：是系统的工作基础，各种不同的测试卡(板)具有不同的功能。最基本的测试卡(板)包括革兰氏阳、阴性菌鉴定卡(板)，革兰氏阳、阴性菌药敏试验卡(板)。使用时应根据涂片和革兰氏染色结果进行选择。

　　(2) 菌液接种器：可分为真空接种器和活塞接种器，以真空接种器较为常用。可将配好的菌液接种至测试卡中。

　　(3)培养和监测系统：测试卡(板)接种菌液后即可放入孵箱/读数器中进行培养和监测。监测系统每隔一定时间对每孔的透光度或荧光物质的变化进行检测，并将检测数据传送给数据管理系统。

　　(4)数据管理系统：数据管理系统就象整个系统的神经中枢，始终保持与孵箱/读数器、打印机的联络，控制孵箱温度，自动定时读数，负责数据的转换及分析处理。

　　5. 简述自动化抗生素敏感性试验的检测原理。

　　答：自动化抗生素敏感性试验使用药敏测试板(卡)进行测试，其实质是微型化的肉汤稀释试验。将抗生素微量稀释在条孔或条板中，加入菌悬液孵育后放入仪器或在仪器中直接孵育，仪器每隔一定时间自动测定细菌生长的浊度，或测定培养基中荧光指示剂的强度或荧光原性物质的水解，观察细菌的生长情况。得出待检菌在各药物浓度的生长斜率，经回归分析得到最低抑菌浓度MIC值，并根据CLSI标准得到相应敏感度：敏感“S”、中度敏感“MS”和耐药“R”。