第六章 色谱法

　　色谱法是一种物理或物理化学分离分析方法。先将混合物中各组分分离而后逐个分析，是分析混合物最有力的手段。具有高灵敏度、高选择性、高效能、分析速度快、应用范围广等优点。

　　色谱过程是物质分子在相对运动的两相(固定相和流动相)间分配平衡的过程，可用分配系数K和容量因子k描述。

　　例题：色谱过程使物质分子在; A.溶液中达到平衡的过程B. 两相中平衡的过程C. 固定相中分配的过程 D. 流动相中溶解的过程

　　E. 相对运动的两相(流动相与固定相)间分配平衡的过程 答案: E

　　1.分配系数K=Cs/Cm，与组分、固定相和流动相性质和温度有关。

　　2.容量因子k=Ws/Wm，不仅与组分、固定相和流动相性质和温度有关，还与两相体积有关。容量因子不等是色谱分离的先决条件。

　　3.色谱过程方程：保留时间与分配系数关系tR=t0(1+k)

　　第一节 薄层色谱法

　　掌握薄层色谱法的基本原理、操作方法以及在药物鉴别、检查中的应用。

　　一、基本原理

　　1.吸附薄层色谱：吸附剂对不同组分A和B具有不同吸附能力，展开剂也对A和B有不同溶解、解吸能力，当展开剂不断展开， A、B在吸附剂和展开剂之间连续不断吸附解吸，产生差速迁移得到分离。

　　2.比移值：Rf=l/l0，为组分迁移距离与展开剂迁移距离之比

　　比移值的最佳范围是0.3～0.5，可用范围是0.2～0.8。

　　影响比移值因素：①被分离物质的结构和性质。极性较强的组分Rf较小。②薄层板性质。吸附剂活性越强，吸附作用就越强，Rf越小。③展开剂性质。极性越强展开剂Rf值增大④展开剂蒸气饱和度对Rf也有较大影响。

　　3.分离度：R=2d/(W1+W2)，两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度的比值

　　二、操作方法

　　1.吸附剂和展开剂的选择

　　(1)吸附剂：常用有硅胶、氧化铝、聚酰胺、硅藻土等。硅胶、氧化铝的活性与含水量有关，含水量高，活性低，吸附力弱;聚酰胺表面的酰胺基可形成氢键，选择性高。

　　(2)展开剂：极性较强的展开剂适用于极性较强组分的洗脱;极性较弱的展开剂适用于极性较弱组分的洗脱。加入少量酸、碱可以使极性物质斑点集中，减少拖尾，提高分离度。

　　选择一般原则是，分离极性较强组分时选用活性低的薄层板，以极性强的展开剂展开。分离弱极性组分时，宜选用活性高的薄层板，以极性弱的展开剂展开。调整待测组分Rf0.3～0.5范围内。

　　2.薄层板制备：1份固定相与3份水混和涂布，110℃烘30分钟。

　　3.点样与展开：点样一般为直径2～4mm圆点，距底2.0cm;展开距离一般为10～15cm。

　　4.斑点定位：有色可直接观察;有荧光在紫外灯下观察;喷洒显色剂使组分显色。

　　三、应用 1.鉴别：比较供试品与对照品溶液的比移值 2.杂质检查：杂质对照品比较法;高低浓度对比法